ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表达对病人预后的影响及其机制研究

发布时间：2017-09-20 19:13

  本文关键词：ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表达对病人预后的影响及其机制研究

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【摘要】：[研究背景]肺癌是世界范围内发病路和死亡率均很高的恶性肿瘤,严重威胁着人类的生命健康。非小细胞肺癌(NSCLC, non-small-cell lung cancer)是肺癌最常见的类型,占肺癌所有类型的的85%。ILT4是免疫球蛋白样转录因子家族的一员,主要通过免疫受体络氨酸抑制基序产生抑制信号。本课组前期研究在NSCLC细胞中检测到ILT4的表达,且其表达与患者临床预后具有相关性,ILT4可以通过免疫调节和非免疫调节参与促进NSCLC进展的过程。HLA-G属于非经典MHCI分子,可在肿瘤组织中表达并发挥免疫逃避的作用。已有研究证实,HLA-G在NSCLC患者肺癌组织和血浆中均有表达,并与患者临床病理参数和预后相关。综上所述,ILT4和HLA-G均可表达于NSCLC中,而且均可以影响NSCLC的进程。由此我们推测,ILT4和HLA-G可能通过相互作用参与NSCLC的进展。据我们所知,关于ILT4和HLA-G在NSCLC中的共表达作用和相互调节机制目前尚无人研究。本课题组拟研究ILT4和HLA-G在NSCLC组织和细胞中的共表达,分析二者共表达与NSCLC患者预后的关系,并进一步研究二者参与NSCLC进展的分子生物学机制,这将对提高NSCLC治疗的有效率、延长病人的无病生存期、改善预后具有重要意义。[目的]明确ILT4及HLA-G在NSCLC细胞系和肿瘤组织中的共表达情况；明确ILT4与HLA-G的共表达对NSCLC患者预后的影响；明确ILT4与HLA-G在NSCLC中共表达的相互调节作用；探究二者相互作用影响NSCLC发生发展的可能机制；[方法]1、采用免疫组化方法,检测81例NSCLC肿瘤组织中ILT4和HLA-G的表达情况,分析ILT4与HLA-G表达之间的相关性,从而分析ILT4-HLA-G共表达与患者临床病理参数的关系；2、收集81例患者病历资料,采用SPSS 18.0统计学分析软件中Kaplan-Meier法分析并绘制生存曲线,观察ILT4与HLA-G的共表达对NSCLC患者生存和预后的影响。3、采用RT-PCR和Western Blot的方法,检测5株NSCLC细胞系A549、H1650、H226、H1299、H1975中ILT4及HLA-G mRNA和蛋白水平的表达情况。4、检测上调或下调受体ILT4的表达是否对HLA-G的表达产生影响。采用瞬时转染技术,分别用Pez-lv105-ILT-4 (ILT-4 vector)质粒瞬时转染ILT4低表达细胞株(H1650)上调ILT4的表达,用pGPU6/GFP/Neo-shILT4 (shILT4)质粒瞬时转染ILT4高表达细胞株(A549)下调ILT4的表达,通过RT-PCR和Western Blot的方法,检测相应细胞株中HLA-G mRNA和蛋白水平的表达变化；5、在HLA-G低表达细胞株(1650)中加入不同浓度的HLA-G重组蛋白刺激,采用RT-PCR和Western Blot的方法检测相应细胞株中ILT4 mRNA和蛋白水平的表达变化；采用western blot的方法检测信号通路蛋白pAKT, pERK1/2, pNF-κB。6、在H1650细胞株中加入ILT4封闭性抗体,再加入HLA-G重组蛋白刺激,采用western blot的方法检测信号通路蛋白pERKl/2的表达变化。[结果]1、在NSCLC肿瘤组织中,ILT4和HLA-G存在共表达并与临床参数具有相关性。在81例病例组织中,ILT4和HLA-G的表达有非常明显的相关关系(P(0.0001,R=0.596)。ILT4+/HLA-G+组与其他组(ILT4-/HLA-G-组、ILT4+/HLA-G-组和ILT4-/HLA-G+组)相比,在局部淋巴结转移(p=0.001)和和肿瘤分期(p=0.006)更具相关性。ILT4+/HLA-G+组与ILT4-/HLA-G-组相比,在组织学类型(p=0.042)和细胞分化(p=0.013)也具相关性。2、ILT4和HLA-G的共表达与NSCLC患者预后相关。Kaplan-Meier法计算生存率并绘制生存曲线分析,ILT4+/HLA-G+的患者的生存率明显比ILT4-/HLA-G-患者(p=0.048)和ILT4+/HLA-G-患者(p=0.021)低。但是ILT4+/HLA-G+的患者与ILT4-/HLA-G+的患者相比,生存率无明显差异(p=0.254)。3、在NSCLC细胞系中,ILT4和HLA-G存在共表达。5株NSCLC细胞系A549、H1650、H226、H1299、H1975中均有ILT4及HLA-G的表达。且二者在五铢细胞系中的表达强度具有一致性。4、在NSCLC细胞系中,上调、下调ILT4的表达可影响HLA-G的表达。与对照组相比,上调ILT4表达水平,]HLA-G的mRNA和蛋白表达水平明显升高；下调ILT4表达水平,HLA-G的mRNA和蛋白表达水平也下降。5、HLA-G重组蛋白刺激可以上调ILT4的表达。加入不同浓度的HLA-G重组蛋白刺激,ILT4在mRNA和蛋白水平的表达均上调,并成明显的浓度依赖性。6、HLA-G与ILT4的相互作用可以激活ERK信号通路。在NSCLC中加入HLA-G重组蛋白后,pERK1/2的表达明显增高,而加入ILT4封闭抗体后再用HLA-G重组蛋白刺激,可抵消pERK1/2的增高。[结论]本研究对81例NSCLC患者肿瘤组织进行免疫组化分析,结果显示ILT4-HLA-G共表达与患者淋巴结转移、临床分期及患者预后生存明显相关。NSCLC细胞系中ILT4与HLA-G在mRNA和蛋白水平均存在共表达,且ILT4和HLA-G在NSCLC细胞中的表达可以相互调节。HLA-G与ILT4的相互作用可激活ERK信号通路。因此,我们推测ILT4与HLA-G之间可能存在潜在的相互作用机制,对NSCLC的进展产生影响。ILT4和HLA-G的检测,可能有助于NSCLC的预后预测和指导NSCLC的防治。
【关键词】：非小细胞肺癌 免疫球蛋白样转录因子4 人类白细胞抗原-G 靶向治疗
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要6-9
• ABSTRACT9-13
• 符号说明13-14
• 前言14-17
• 材料和方法17-35
• 结果35-37
• 讨论37-41
• 结论41-42
• 附图表42-47
• 参考文献47-50
• 致谢50-52
• 攻读学位期间撰写的论文52-53
• 外文论文53-66
• 学位论文评阅及答辩情况表66

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本文编号：889891