奥曲肽对胃癌细胞组蛋白H3乙酰化和磷酸化的效应

发布时间：2017-09-21 02:21

  本文关键词：奥曲肽对胃癌细胞组蛋白H3乙酰化和磷酸化的效应

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【摘要】：研究背景组蛋白翻译后修饰(post-translation modifications, PTMs)是信号通路的汇集点,此节点事件是基因表达的关键。信号转导激酶可诱导间期细胞启动子组蛋白H3特定残基的直接磷酸化,导致这些基因迅速的转录诱导。p300是一个具有组蛋白乙酰基转移酶(histone acetyltransferase, HAT)活性的转录辅因子,可在多个残基乙酰化所有4个核心组蛋白以及70个其它蛋白。组蛋白磷酸化和乙酰化的同时诱导为特异性哺乳动物基因活化的关键。我们的前期研究显示,生长抑素类似物奥曲肽(Octreotide, OCT)可下调胃癌细胞磷酸化Akt水平,升高p300-HAT活性,抑制胃癌细胞增殖。研究目的观察OCT对胃癌细胞组蛋白H3磷酸化和乙酰化的效应,探讨组蛋白H3的磷酸化和乙酰化是否参与OCT抑制胃癌细胞增殖的效应。材料与方法1.实验分组 将胃癌细胞SGC7901随机分为4组：实验组1-3加入终浓度为10nmol/L的OCT培养液,分别作用12h、24h和48h；对照组,加入无OCT培养液。收集4组细胞,分别提取核蛋白,用于Western blot。细胞接种于24孔板孔内的盖玻片,同上分组,用于免疫细胞化学。2.Western blot应用Western blot检测4组细胞磷酸化丝氨酸10组蛋白H3 (histone H3 with phosphorylated serine 10, pS10-H3)和乙酰化赖氨酸14组蛋白H3 (histone H3 with acetylated lysine 14, acK14-H3)的蛋白水平,观察OCT对胃癌细胞SGC7901 pS10-H3和acK14-H3蛋白水平的效应。3.免疫细胞化学 应用免疫细胞化学观察4组细胞pS10-H3和acK14-H3的免疫反应性(Immuno-reactivity, IR),并进行半定量分析,检测OCT对胃癌细胞SGC7901 pS10-H3和acK14-H3 IR的效应。4.统计学处理所有数据以均数±标准差(x±s)表示,应用SPSS20.0统计软件处理数据,P0.05为差异有显著性。结果：1.OCT对胃癌细胞pS10-H3蛋白水平的效应 对照组、OCT处理12h、24h和48h组pS10-H3蛋白的相对水平分别为1.005±0.021、0.633±0.022、0.401±0.028和0.089±0.010。实验组与对照组比较具有显著性差异(P0.01)。OCT可显著降低胃癌细胞SGC7901 pS10-H3蛋白水平。2.OCT对胃癌细胞pS10-H3 IR的效应pS10-H3 IR显示为棕色颗粒,主要分布于细胞核周。对照组、OCT处理12h、24h和48h组pS10-H3弱阳性和阳性细胞IR的平均水平分别为0.25±0.07和1.29±0.16、0.23±0.04和1.08±0.12、0.23±0.07和0.54±0.16及0.26±0.05和0.12±0.02。4组细胞的总体IR平均水平分别为1.55±0.09、1.32±0.09、0.77±0.09和0.38±0.07。实验组阳性细胞平均pS10-H3 IR显著低于对照组(P0.01)；然而,实验组弱阳性细胞平均pS10-H3 IR与对照组无显著性差异(P0.05)。实验组与对照组pS10-H3 IR的总体平均水平比较具有显著性差异(P0.01)。OCT可显著降低胃癌细胞SGC7901 pS10-H3 IR。3.OCT对胃癌细胞acK14-H3蛋白水平的效应 对照组、OCT处理12h、24h和48h组acK14-H3的相对水平分别为0.109±0.012、0.237±0.013、0.492±0.014和0.689±0.009。实验组与对照组比较具有显著性差异(P0.01)。OCT可显著升高胃癌细胞SGC7901 acK14-H3蛋白水平。4.OCT对胃癌细胞acK14-H3 IR的效应acK14-H3 IR显示为棕色颗粒,主要分布于细胞核周。对照组、OCT处理12h、24h和48h组acK14-H3弱阳性和阳性细胞IR的平均水平分别为0.06±0.01和0.05±0.02、0.18±0.04和0.35±0.08、0.30±0.04和0.48±0.03及0.32±0.06和1.06±0.07。4组细胞的总体IR平均水平分别为0.15±0.03、0.53±0.11、0.78±0.06和1.39±0.03。实验组弱阳性和阳性细胞平均acK14-H3 IR均显著高于对照组(P0.01)；实验组与对照组acK14-H3 IR的总体水平比较具有显著性差异(P(0.01)。OCT可显著升高胃癌细胞SGC7901 acK14-H3 IR。结论OCT可显著降低胃癌细胞SGC7901组蛋白H3丝氨酸10的磷酸化,显著升高赖氨酸14的乙酰化。结果提示,组蛋白H3丝氨酸10的磷酸化和赖氨酸14的乙酰化可能参与了OCT抑制胃癌细胞增殖的效应。
【关键词】：组蛋白H3 磷酸化 乙酰化 Western blot 免疫细胞化学 胃癌细胞
【学位授予单位】：郑州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-13
• 中英文缩略词13-14
• 1 前言14-17
• 2 材料和方法17-26
• 2.1 材料17-20
• 2.1.1 细胞系及培养条件17
• 2.1.2 主要试剂和仪器设备17-20
• 2.2 主要实验方法20-26
• 2.2.1 Western Blot20-24
• 2.2.3 免疫细胞化学24-26
• 3 结果26-28
• 3.1 OCT对胃癌细胞组蛋白H3丝氨酸10磷酸化的效应26-27
• 3.1.1 OCT对胃癌细胞pS10-H3 IR的效应26
• 3.1.2 OCT对胃癌细胞pS10-H3蛋白水平的效应26-27
• 3.2 OCT对胃癌细胞组蛋白H3赖氨酸14乙酰化的效应27-28
• 3.2.1 OCT对胃癌细胞acK14-H3 IR的效应27
• 3.2.2 OCT对胃癌细跑acK14-H3蛋白水平的效应27-28
• 附图28-32
• 讨论32-38
• 结论38-39
• 参考文献39-42
• 综述42-60
• 参考文献55-60
• 致谢60

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 ;Antiproliferative effect of octreotide on gastric cancer cells mediated by inhibition of Akt/PKB and telomerase[J];World Journal of Gastroenterology;2003年10期

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本文编号：891804