人参炔醇抑制胰腺癌干细胞的增殖及自我更新

发布时间：2017-09-21 05:41

  本文关键词：人参炔醇抑制胰腺癌干细胞的增殖及自我更新

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【摘要】：实验目的通过各种方法及相关蛋白的测定,探讨人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖及自我更新的影响。实验方法(1)胰腺癌干细胞培养:胰腺癌Panc-1细胞在加有EGF、b FGF及B27的干细胞培养体系培养基中培养,参照试剂说明及其他文献培养成胰腺癌干细胞,细胞的CD133+用流式细胞仪进行检测,观察培养后细胞的干性比例;(2)胰腺癌干细胞分选:为了得到更高比例的胰腺癌干细胞,通过流式细胞仪将培养的细胞进行CD133+分选。(3)CCK8实验:将人参炔醇分为0、72、144、287nmol/L四个药物浓度分别作用于胰腺癌干细胞,作用时间为0、12、24、48h,CCK8实验选出合适的药物作用浓度及最佳的作用时间;(4)克隆实验:浓度为0、72、144、287nmol/L的人参炔醇作用于胰腺癌干细胞48h后,将干细胞消化为单个细胞,并重新种于6孔板中培养两周,形成集落后,对实验组与对照组集落的数目进行比较;(5)western blot实验:检测增殖相关蛋白Ki67、PCNA及自我更新有关蛋白β-catenin。实验结果(1)经干细胞培养体系培养的胰腺癌干细胞,用流式细胞仪检测其CD133+比例为9.96%,对照组干性比例为2.21%,两组相比具显著统计学意义(P0.001);(2)经过细胞分选后,胰腺癌干细胞比例为96.78%,对照组为3.67%,两组相比具有显著统计学意义(P0.001);(3)CCK8实验OD值检测显示,人参炔醇减少胰腺癌干细胞的存活率,药物作用具有浓度依赖性,并随着时间延长作用加强,0、72、144、287nmol/L的人参炔醇作用胰腺癌干细胞48h后存活率分别为100%、63.13%、50.32%、41.62%,结果具有显著统计学意义(P0.001);(4)克隆实验中,数量上实验组的集落少于对照组(P0.001);(5)人参炔醇作用48h后,胰腺癌干细胞的Ki67、PCNA及β-catenin蛋白表达量均降低。结论(1)人参炔醇作用于胰腺癌干细胞,抑制其增殖及自我更新能力;(2)其机制可能与下调Ki67、PCNA表达,阻滞Wnt/β-catenin信号通路有关。
【关键词】：人参炔醇 胰腺癌干细胞 自我更新
【学位授予单位】：江苏大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-11
• 英汉缩略语名词对照11-12
• 第一章 绪论12-17
• 1.1 人参炔醇12-13
• 1.2 胰腺癌13
• 1.3 肿瘤干细胞13-15
• 1.4 通路15-17
• 第二章 人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖作用研究17-33
• 2.1 材料与方法17-27
• 2.1.1 细胞来源17
• 2.1.2 主要试剂17-18
• 2.1.3 主要仪器18
• 2.1.4 主要试剂配制18-19
• 2.1.5 细胞培养19-21
• 2.1.6 细胞计数21
• 2.1.7 药物浓度和作用时间点设置21-22
• 2.1.8 胰腺癌干细胞干性测定及分选22-23
• 2.1.9 CCK8实验检测人参炔醇对胰腺癌干细胞增殖的作用23-24
• 2.1.10 KI67、PCNA蛋白表达24-27
• 2.2 统计分析27
• 2.3 结果27-31
• 2.3.1 检测胰腺癌干细胞比例及干细胞分选结果27-29
• 2.3.2 CCK8实验示人参炔醇可降低胰腺癌干细胞的存活率29-30
• 2.3.3 人参炔醇抑制胰腺癌干细胞增殖相关蛋白的表达30-31
• 2.4 讨论31-33
• 第三章 人参炔醇对胰腺癌干细胞自我更新作用研究33-43
• 3.1 材料与方法33-38
• 3.1.1 细胞来源33
• 3.1.2 主要试剂33
• 3.1.3 主要仪器33-34
• 3.1.4 主要试剂配制34-35
• 3.1.5 细胞培养35
• 3.1.6 细胞计数35-36
• 3.1.7 药物浓度和作用时间点设置36
• 3.1.8 细胞克隆实验36-37
• 3.1.9 Wnt/β- catenin信号通路中β- catenin蛋白的表达及CD133表达37-38
• 3.2 统计分析38
• 3.3 结果38-40
• 3.3.1 人参炔醇抑制胰腺癌干细胞集落的形成38-39
• 3.3.2 人参炔醇降低增殖及自我更新有关蛋白的表达39-40
• 3.3.3 人参炔醇作用于胰腺癌干细胞后CD133的表达变化40
• 3.4 讨论40-43
• 第四章 结论43-44
• 参考文献44-48
• 综述48-59
• 参考文献55-59
• 致谢59-60
• 攻读硕士学位期间公开发表的论文60

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本文编号：892730