MiR-23a对人乳腺癌细胞自噬的影响
发布时间：2017-09-21 15:17
本文关键词：MiR-23a对人乳腺癌细胞自噬的影响
【摘要】：目的:研究参与人乳腺癌细胞自噬调控的mi RNAs。方法:1.课题组前期通过western-blot方法筛选出micro RNAs(mi RNAs)参与调控乳腺癌细胞自噬,本课题从中选择四个mi RNAs并通过western-blot方法检测LC3蛋白的表达情况进行下一步实验。2.选择两株乳腺癌细胞T47D和MCF-7分别转染mi R-23a模拟物(mi R-23a mimic)和mi R-23a抑制物(mi R-23a ASO)后应用western-blot、细胞免疫荧光和细胞电镜方法,验证mi R-23a对人乳腺癌细胞自噬的影响。3.应用流式细胞术检测mi R-23a对人乳腺癌细胞凋亡的影响。4.应用生物信息学方法预测mi R-23a潜在的靶基因。结果:1.Western-blot结果显示,与阴性对照组相比较,乳腺癌MCF-7细胞转染mi R-24mimic,mi R-7 mimic,mi R-23a mimic,mi R-513a-5p mimic后mi R-23a明显增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。2.体外自噬实验结果:(1)Western-blot结果显示,与阴性对照组相比较,T47D细胞转染mi R-23a mimic后明显下调p62蛋白的表达,而增加LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值,MCF-7细胞转染mi R-23a ASO后则明显上调p62蛋白的表达,而降低LC3Ⅱ/LC3Ⅰ比值。(2)细胞免疫荧光结果显示,细胞转染mi R-23a mimic后GFP-LC3点状聚集数目显著增多,即自噬阳性细胞达到22.6%(P㩳0.05),阴性对照组自噬阳性细胞为4%。细胞转染mi R-23a ASO后GFP-LC3点状聚集数目显著减少,即自噬阳性细胞降低至3%(P0.05),阴性对照组自噬阳性细胞为10%。(3)细胞电镜结果显示,T47D细胞转染了mi R-23a mimic后,自噬小体明显多于对照组。3.流式细胞术分析结果显示,与阴性对照组相比较,T47D细胞转染mi R-23a mimic后凋亡细胞明显减少至42%(P0.05)。4.生物信息学方法预测mi R-23a的靶基因中,部分发挥了抑制自噬和促进凋亡的作用。结论:mi R-23a促进人乳腺癌细胞自噬,抑制其凋亡。
【关键词】：miR-23a 自噬 凋亡 乳腺肿瘤
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：
- 英文缩写词表5-6
- 中文摘要6-8
- 英文摘要8-10
- 引言10-14
- 材料方法14-27
- 结果27-33
- 讨论33-39
- 结论39-40
- 参考文献40-46
- 附录46-48
- 致谢48-49
- 综述49-60
- 参考文献56-60
【参考文献】
中国期刊全文数据库 前1条
1 贺荣芳;谢黎明;赵强;王婧;文龙;王艳;唐海林;;miR-23a与RUNX1在胃癌中的表达及其临床意义[J];中国普通外科杂志;2012年05期
，本文编号：895298
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