粘细菌代谢产物NX52和NX83作用大肠癌细胞的增殖影响

发布时间：2017-09-22 06:14

  本文关键词：粘细菌代谢产物NX52和NX83作用大肠癌细胞的增殖影响

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【摘要】：粘细菌在每克土中约有103~106个子实体,在各类土壤中普遍存在。粘细菌的生长具有极为复杂的多细胞行为,它们可以进行细胞-细胞的信号传递、细胞间的协同感应,粘细菌还可以运动,在发育过程中形成菌体子实体,因而粘细菌的社会学特征非常显著。由于粘细菌的特性不同于其他的微生物,所以具有特异性的粘细菌在微生物学研究中占有举足轻重的地位。随着越来越多的具有药理性和生物活性的次级代谢产物的发现,药源菌家族中的粘细菌也不出意外地获得了科学家们的关注,并且关注度已超过假单胞杆菌冲进前三甲。据报道,粘细菌的具有生物活性的代谢产物多达十余种,其中包含芳香族杂环、醌类、大环类、多烯类、聚醚类、肽类化合物等,在经过分离提纯的次级代谢产物中发现七十余种基本结构,而在其它微生物中仅发现三种类似结构。其次,粘细菌的另外一种特性就是同一菌株粘细菌可产生同一种基本结构的相关或不相关的类似化合物,这种特性在筛选高效低毒的药物先导体或化合物方面提供了可靠的资源平台。粘细菌最广为人知的特性就是它具有菌株特异性,而不仅仅是存在种或属间的特异性,数十种甚至数百种以上结构相异或相似的化合物可以同一时间产生自同一株粘细菌,这些化合物中有许多是抑制真核细胞生长发育的潜在药源化合物或先导化合物,其中不乏一些抑制肿瘤生长或真菌生长的化合物,其抑制效果往往较其他微生物活性代谢产物显著。除此以外,粘细菌的胞外粘液质、胞外多糖等对于人类医疗事业的进步具有不可忽视的应用价值。本实验对陕西省微生物研究所建立的较大规模秦巴山区粘细菌菌株库及其代谢产物库的两种粘细菌粗提物NX52和NX83进行了体外细胞毒性筛选。用不同浓度的粘细菌代谢产物0.1mg/ml、1mg/ml和10mg/ml分别处理结直肠癌细胞SW480和SW1463一定时间,验证这两种粘细菌粗提物的细胞毒作用,为今后粘细菌库及其代谢产物库的全面筛选,打下良好的基础。本实验后期可深入分析实验用粘细菌粗提物的化学本质,分离出单体物质进行抗肿瘤药物或抑制真菌药物的开发利用,为粘细菌代谢产物库这类生物资源的有效开发利用进一步奠定基础。实验验证粘细菌发酵粗提物NX52和NX83在不同作用浓度不同作用时间的情况,采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测其对大肠癌细胞的增殖抑制作用,24h组、48h组和72h组不同浓度粘细菌发酵粗提物对结直肠癌细胞SW480和SW1463细胞毒性存在显著差异,随着药物浓度增高、药物时间延长,抑制结直肠癌细胞的生长增殖作用也随之增强,两种发酵粗提物NX52和NX83对上述肿瘤细胞的增殖呈现时间依赖和剂量依赖,在相同浓度相同作用时间下,代谢产物NX83对肿瘤细胞的增殖抑制作用更为显著,有开发成为抗肿瘤药物的潜能,择其进行下一步细胞毒性机制研究。粘细菌不同浓度(0.1mg/ml和1mg/ml)发酵粗提物NX83作用48h后,浓度0.1mg/ml组细胞凋亡率以及浓度1mg/ml组细胞凋亡率相较阴性对照组细胞凋亡率均有显著增高。随着发酵粗提物浓度的升高,早期凋亡及晚期凋亡/坏死细胞也相应多地出现。进一步证明粘细菌发酵粗提物NX83具有体外抑制肿瘤生长活性,作用机制在一定程度上可以认为是通过诱导癌细胞早期凋亡或晚期凋亡/坏死达到杀伤肿瘤细胞效应。
【关键词】：粘细菌 代谢产物 结直肠癌细胞 细胞凋亡
【学位授予单位】：延安大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.34
【目录】：

• 摘要3-5
• Abstract5-8
• 引言8-13
• 第一章 实验材料与方法13-19
• 1.1 实验材料13-15
• 1.1.1 代谢产物13-14
• 1.1.2 细胞株14
• 1.1.3 实验分组14
• 1.1.4 实验试剂14
• 1.1.5 试剂配制14-15
• 1.1.6 实验仪器15
• 1.2 实验方法及步骤15-19
• 1.2.1 肿瘤细胞培养15
• 1.2.2 肿瘤细胞传代培养15-16
• 1.2.3 细胞计数方法16
• 1.2.4 细胞形态学观察16
• 1.2.5 细胞增殖抑制试验(MTT法)16-17
• 1.2.6 流式细胞仪分析17-19
• 1.2.7 统计学分析19
• 第二章 实验结果19-25
• 2.1 倒置显微镜观察结果19-22
• 2.2 MTT实验检测细胞增殖抑制结果22-24
• 2.3 流式细胞仪检测细胞凋亡结果24-25
• 第三章 分析讨论25-30
• 第四章 结论30-32
• 参考文献32-35
• 致谢35-36
• 攻读学位期间研究成果36

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前3条

1 李峨,陈信义,王玉芝;九种中药活性成分抗耐药肿瘤细胞体外研究[J];北京中医药大学学报;2004年02期

2 方蓉,李芳秋,武建国;MTT比色法的条件探讨[J];临床检验杂志;2003年01期

3 陈R，

本文编号：899216