E-钙粘蛋白在内皮祖细胞和间充质干细胞之间的粘附作用及机制研究

发布时间：2017-09-22 06:26

  本文关键词：E-钙粘蛋白在内皮祖细胞和间充质干细胞之间的粘附作用及机制研究

  更多相关文章： E-钙粘蛋白 血管内皮祖细胞 骨髓间充质干细胞 细胞粘附 转染

【摘要】：目的:探讨E-钙粘蛋白(E-cadherin,E-cad)在内皮祖细胞(Endothelial progenitor cells,EPCs)和间充质干细胞(Mesenchymal stem cells,MSCs)之间的粘附作用及机制。方法:1.体外C57BL/6J(WT)小鼠骨髓腔分离培养EPCs和MSCs。2.使用Mito Tracker Red标记EPCs,DAPI标记MSC。3.采用免疫荧光的方法观察E-cad在细胞内的表达情况。4.细胞粘附实验观察EPCs与MSCs体外粘附现象。5.使用E-cad Si-RNA干扰EPCs和MSCs中E-cad的表达。6.RT-PCR和Western-blot检测Si-RNA转染效率。7.转染成功后在成血管的凝胶上进一步检测二者粘附现象。8.ELISA检测E-cadherin的表达。9.RT-PCR和Western-blot检测MSCs和EPCs相互作用后E-cad/β-catenin的m RNA和蛋白表达。10.MSCs和EPCs分别加入β-catenin特异性抑制剂XAV939后,在成血管的凝胶上进一步检测二者粘附现象。结果:1.体外共培养MSCs和EPCs,E-cad的表达显著上调。2.E-cad Si-RNA成功转染MSCs和EPCs,E-cad m RNA和E-cad蛋白的表达显著下调。3.Si-RNA成功转染MSCs和EPCs后,二者粘附现象明显受到抑制。4.沉默EPCs和MSCs的E-cad后,二者在成血管凝胶上的粘附及成管现象均受到显著抑制。5.MSCs和EPCs均能分泌E-钙粘蛋白。6.EPCs分泌的E-cad通过上调MSCs的β-catenin来调节二者共粘附。7.β-catenin信号通路调控MSCs和EPCs的粘附。结论:E-cad通过β-catenin通路介导EPCs和MSCs之间的粘附。
【关键词】：E-钙粘蛋白 血管内皮祖细胞 骨髓间充质干细胞 细胞粘附 转染
【学位授予单位】：石河子大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R730.2
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-9
• 缩略语表 (Abbreviations)9-12
• 前言12-14
• 第一部分：E-钙粘蛋白介导血管内皮祖细胞和骨髓间充质干细胞之间的粘附作用研究14-34
• 1 实验材料14-16
• 1.1 实验动物14
• 1.2 实验主要试剂和仪器14-16
• 2 实验方法16-26
• 2.1 骨髓间充质干细胞(BM-MSCs)的分离、鉴定及标记16-17
• 2.2 骨髓血管内皮前体细胞(BM-EPCs)的分离培养、鉴定和标记17-18
• 2.3 共培养实验18
• 2.4 粘附实验18-19
• 2.5 免疫荧光实验检测E-cad的表达19
• 2.6 转染实验19-20
• 2.7 实时定量PCR (RT-PCR)检测20-22
• 2.8 Western-blot22-26
• 2.9 统计学方法26
• 3 结果26-33
• 3.1 DAPI成功标记MSCs26
• 3.2 Mito Tracker Red成功标记EPCs26-27
• 3.3 体外共培养EPCs和MSCs，E-cad的表达显著上调27-28
• 3.4 SiRNA干扰EPCs和MSCs，E-cad m RNA和E-cad的表达显著下调28-30
• 3.5 SiRNA干扰EPCs和MSCs后，二者粘附现象明显受到抑制30-32
• 3.6 E-cad介导EPCs和MSCs的粘附32-33
• 4 讨论33-34
• 第二部分：β-catenin介导血管内皮祖细胞和骨髓间充质干细胞之间的粘附机制研究34-46
• 1 实验材料34-35
• 1.1 实验动物34
• 1.2 实验主要试剂和仪器34-35
• 2 实验方法35-39
• 2.1 间充质干细胞(MSCs)的标记35
• 2.2 血管内皮祖细胞(EPCs)的标记35-36
• 2.3 共培养实验36
• 2.4 ELISA检测E-cad的表达36
• 2.5 实时定量PCR (RT-PCR)检测36-39
• 2.6 Western-blot39
• 2.7 统计学方法39
• 3 结果39-43
• 3.1 MSCs和EPCs均能分泌E-cad39-40
• 3.2 EPCs分泌的E-cad通过上调MSCs的 β-catenin来调节二者共粘附40-42
• 3.3 β-catenin信号通路调控MSCs和EPCs的粘附42-43
• 4 讨论43-46
• 结论46-47
• 参考文献 (References)47-52
• 文献综述52-66
• 参考文献(References)61-66
• 致谢66-67
• 作者简介67-69
• 导师评阅表69

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