白头翁皂苷A对肺癌细胞放射敏感性的影响及机制的研究

发布时间：2017-09-23 18:08

  本文关键词：白头翁皂苷A对肺癌细胞放射敏感性的影响及机制的研究

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【摘要】：目的:研究中药提取物白头翁皂苷A对人非小细胞肺癌生长及放射敏感性的影响,初步研究相关作用机制,探讨白头翁皂苷A作为新型放疗增敏剂的可能性。方法:选用人正常支气管上皮细胞系Beas-2B、人非小细胞肺癌细胞系A549、H1975作为研究对象,采用:(1)四甲基偶氮唑盐比色法(MTT)检测白头翁皂苷A对人正常支气管上皮细胞与人非小细胞肺癌细胞生长的影响,并筛选出实验所用药物浓度;(2)细胞克隆形成实验检测白头翁皂苷A对非小细胞肺癌细胞放射敏感性的影响;(3)流式细胞术观察白头翁皂苷A对受照射后非小细胞肺癌细胞周期的影响;(4)磷脂酰丝氨酸外翻法(AnnexinⅤ和PI双染法)检测白头翁皂苷A对照射后非小细胞肺癌细胞凋亡的影响;(5)磷酸化?-H2AX免疫荧光染色和彗星实验检测白头翁皂苷A对照射后非小细胞肺癌细胞DNA损伤的影响;(6)Western blot法检测白头翁皂苷A对照射后非小细胞肺癌细胞的DNA损伤修复相关蛋白、周期相关蛋白以及凋亡相关蛋白表达的影响;(7)统计学分析。结果:(1)白头翁皂苷A明显抑制非小细胞肺癌细胞系A549、H1975细胞的生长,其半抑制浓度IC50分别为13.12±0.79μg/ml、10.56±0.68μg/ml,而对人正常支气管上皮细胞Beas-2B的毒性作用相对较弱,其IC50为19.84±1.12μg/ml;本研究中选取细胞存活约80%的药物浓度(约2μg/ml)做为实验用药物浓度;(2)白头翁皂苷A增加非小细胞肺癌细胞对电离辐射的敏感性:白头翁皂苷A联合照射组相比于单纯照射组,A549细胞系克隆形成率显著降低(P0.05),放射增敏比为1.17;H1975细胞系中白头翁皂苷A联合照射组比单纯照射组克隆形成率显著降低(P0.05),放射增敏比为1.28。(3)白头翁皂苷A显著增加受照射后非小细胞肺癌细胞系A549、H1975细胞周期G2/M期阻滞:A549细胞G2/M期细胞的比例由单纯照射组(33.16±1.45)%增加至加药联合照射组中的(46.05±1.76)%(p0.05);单纯照射组h1975细胞g2/m期细胞的比例为(7.62±1.32)%,加药联合照射组h1975细胞中该比例增加至(63.68±1.31)%(p0.05)。(4)白头翁皂苷a显著增加照射后a549细胞的早期凋亡,单纯照射组和加药联合照射组早期凋亡分别为(26.81±1.70)%、(58.36±2.18)%(p0.05);白头翁皂苷a能显著增加照射后h1975细胞的晚期凋亡,细胞单纯照射组和加药联合照射组晚期凋亡分别为(24.31±1.94)%、(46.69±2.42)%(p0.05)。(5)白头翁皂苷a能增加非小细胞肺癌细胞系a549、h1975细胞中由电离辐射引起的dna损伤:在磷酸化?-h2ax免疫荧光染色实验中,对对照组、单纯加药组、单纯照射组和加药联合照射组a549细胞中磷酸化γ-h2ax焦点进行计数,分别为(6.38±2.47)/细胞、(12.08±5.28)/细胞、(21.84±4.87)/细胞、(30.17±7.85)/细胞(p0.05);各组h1975细胞中磷酸化γ-h2ax抗体焦点形成,分别为(10.08±3.87)/细胞、(24.18±3.52)/细胞、(16.06±2.77)/细胞、(34.66±10.06)/细胞(p0.05);在单细胞凝胶电泳实验中,对照组、单纯加药组、单纯照射组和加药联合照射组a549细胞中彗尾的相对长度(taildna%),分别为(2.24±0.09)%/细胞、(4.38±0.89)%/细胞、(5.33±0.41)%/细胞、(6.04±1.48)%/细胞(p0.05);各组h1975细胞中彗尾的相对长度(taildna%),分别为(1.12±0.41)%/细胞、(4.91±1.35)%/细胞、(2.87±0.91)%/细胞、(6.92±1.35)%/细胞(p0.05);(6)westernblot法检测发现,相比于单纯照射组,白头翁皂苷a联合电离辐射处理后,a549、h1975细胞中dna损伤修复相关蛋白mre11、dna-pkcs、ku80,周期相关蛋白cycline、cyclinb1以及抗凋亡相关蛋白bcl-2的表达均下降。结论:(1)白头翁皂苷a对非小细胞肺癌细胞不仅具有生长抑制作用,白头翁皂苷a联合电离辐射还可显著增加对非小细胞肺癌细胞的杀伤作用。(2)白头翁皂苷a影响非小细胞肺癌细胞对电离辐射的敏感性的机制可能与其参与调控照射后细胞g2/m期阻滞、凋亡以及抑制细胞dna损伤修复蛋白有关。
【关键词】：白头翁皂苷A 非小细胞肺癌 细胞增殖 细胞周期 细胞凋亡 电离辐射 DNA损伤修复
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R734.2
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-11
• 引言11-17
• 参考文献13-17
• 第一部分 白头翁皂苷A(PSA)对肺癌细胞增殖及放射敏感性的影响17-36
• 前言17-18
• 材料与方法18-22
• 结果22-32
• 讨论32-33
• 参考文献33-36
• 第二部分 白头翁皂苷A(PSA)联合电离辐射对肺癌细胞的作用及分子机制的初步研究36-53
• 前言36-37
• 材料与方法37-42
• 结果42-49
• 讨论49-51
• 参考文献51-53
• 结论53-54
• 综述 中草药白头翁提取物的抗肿瘤作用54-57
• 参考文献56-57
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文57-58
• 致谢58-59

【参考文献】

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1 蔡鹰,陆瑜,梁秉文,余国祥,谢瑛,张能方,亢寿海;白头翁体内抗肿瘤作用的实验研究[J];中草药;1999年12期

2 王长福;孙世芹;王有志;辛萍;;朝鲜白头翁抗炎有效部位化学成分研究[J];中草药;2013年18期

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本文编号：906701