尼妥珠单抗对食管鳞癌ECA-109细胞放射敏感性的影响及机制研究

发布时间：2017-09-23 19:11

  本文关键词：尼妥珠单抗对食管鳞癌ECA-109细胞放射敏感性的影响及机制研究

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【摘要】：目的:探讨尼妥珠单抗对人食管癌细胞的放射增敏的作用及可能机制,为临床应用提供理论依据。方法:1采用Western blot技术检测人食管鳞癌细胞ECA-109、TTN、TE-1、TE-13、YES-2、EC9706和KYES-450中EGFR的表达。2将ECA-109细胞分为:空白对照组、单纯照射组(4Gy照射)、单纯药物组(900n M尼妥珠单抗)、联合组(900n M尼妥珠单抗+4Gy照射),采用Western blot技术检测尼妥珠单抗对人食管鳞癌ECA-109细胞EGFR及p-EGFR表达影响。3采用克隆形成实验检测尼妥珠单抗(900n M)对食管癌ECA-109细胞的放射敏感性的影响。4采用流式细胞技术测定各组细胞周期分布及凋亡率的情况。5采用激光共聚焦显微镜检测各组食管癌ECA-109细胞核内γH2AX焦点形成的变化情况。6采用Western blot技术检测各组食管癌ECA-109细胞Akt、p-Akt、DNA-PKcs、p-DNA-PKcs、γH2AX蛋白表达的影响。结果:1不同食管癌细胞株中EGFR蛋白的表达Western blot实验结果显示:七种食管癌细胞株ECA-109、TTN、TE-1、TE-13、YES-2、EC9706和KYES-450细胞均表达EGFR,七组之间总体EGFR表达水平差别有显著性意义(F=10.00,P0.05),ECA-109细胞中EGFR的表达水平最高。其次为TE-13。YES-2、EC9706和KYES-450之间EGFR的表达水平差异无统计学意义(P0.05)。2尼妥珠单抗对人食管鳞癌ECA-109细胞EGFR及p-EGFR表达影响结果Western blot实验结果显示:各组细胞EGFR的表达水平无显著性差异(P0.05)。照射组p-EGFR的表达水平较空白对照组明显升高(P0.05);与照射组和药物组比较,联合组的p-EGFR的表达水平明显降低(P0.05)。3尼妥珠单抗对人食管鳞癌ECA-109细胞放射敏感性的影响克隆形成实验结果显示:根据放射敏感性参数分析,与对照组比较,联合组细胞的D0、Dq、N和SF2值明显降低,差异有统计学意义(P0.05);放射增敏比为1.35。4尼妥珠单抗对人食管鳞癌ECA-109细胞的细胞周期及凋亡的影响流式细胞技术检测结果显示:药物组细胞出现了明显的G0/G1期阻滞,G0/G1期细胞比例明显升高,G2/M期也升高,与空白对照组的差异无统计学意义(P0.05)。与药物组相比,照射组细胞G0/G1期比例降低,G2/M期升高,联合组细胞G2/M期阻滞最为明显,所占比例达到(30.28±2.23)%。凋亡结果显示:空白对照组、照射组、药物组和联合组的凋亡率为:(2.76±0.23)%、(19.75±1.11)%、(9.54±0.52)%、和(41.31±1.52)%。组间比较差别有显著性意义(F=368.5,P0.05)照射组ECA-109细胞凋亡率高于药物组;联合组ECA-109细胞凋亡率大于照射组和药物组作用之和。5尼妥珠单抗对人食管鳞癌ECA-109细胞放射敏感性机制研究5.1激光共聚焦显微镜检测γH2AX焦点结果显示:激光共聚焦显微镜观察各组细胞核内γH2AX焦点情况,红紫色亮点为γH2AX焦点。照射组γH2AX的焦点明显高于药物组(P0.05);联合组与照射组和药物组比较γH2AX焦点明显升高(P0.05)。5.2 Western blot检测Akt及DNA损伤修复相关蛋白结果显示:各组的Akt和DNA-PKcs的表达水平未见明显统计学差异(P0.05);p-Akt和p-DNA-PKcs在照射组较空白对照组及药物组表达水平明显升高,且差异有统计学意义(P0.05);与照射组和单药组比较,联合组的p-Akt和p-DNA-PKcs表达水平明显降低(P0.05)。γH2AX在照射组及药物组均较空白对照组表达明显升高(P0.05)。与照射组和单药组比较,联合组γH2AX的表达水平明显升高(P0.05)。结论：尼妥珠单抗增加EGFR高表达的食管鳞癌ECA-109细胞的放射敏感性,其增敏机制可能与尼妥珠单抗阻止EGFR下游信号的传导,下调p-Akt的表达,诱导ECA-109细胞G2/M期阻滞,阻碍DNA损伤修复增加食管鳞癌ECA-109细胞的凋亡有关。
【关键词】：尼妥珠单抗 食管癌细胞 放射敏感性 表皮生长因子受体 Akt DNA损伤修复
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 引言11-12
• 材料与方法12-22
• 结果22-24
• 附图24-29
• 附表29-30
• 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述 PI3K/Akt信号通路在恶性肿瘤中的研究进展37-51
• 参考文献45-51
• 致谢51-52
• 个人简历52

【参考文献】

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1 陈静;蓝玉玲;杨永强;刘宗文;曲宝林;李建雄;孟玲玲;冯林春;;抗表皮生长因子受体单抗联合X线照射对人鼻咽癌细胞株CNE-2的作用[J];解放军医学院学报;2014年04期

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本文编号：906983