胰腺星状细胞（PSCs）激活过程中类上皮—间质转化（EMT）机制研究

发布时间：2017-09-24 06:35

  本文关键词：胰腺星状细胞（PSCs）激活过程中类上皮—间质转化（EMT）机制研究

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【摘要】：背景:胰腺导管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)以间质中大量纤维结缔组织增生为其组织学特点,激活的胰腺星状细胞(Pancreatic stellate cells,PSCs)则是参与间质纤维化的主要细胞成分。然而,PSCs激活的机制现仍不明确。根据其激活的特点,我们提出假设,PSCs活化的核心事件是上皮-间质转化(EMT)。目的:通过检测PSCs激活前后的细胞功能、形态、基因表达方面的变化,阐明PSCs活化过程中是否存在类似EMT的过程,并探索其可能的分子机制。方法:通过酶消化-密度梯度离心法从Sprague-Dawley大鼠体内提取正常静止态PSCs,原代分离的PSCs均经过免疫荧光染色和免疫化学染色鉴定。本研究将原代分离后培养40h的细胞作为静止态PSCs,分离后10d的细胞作为激活态PSCs,分别对两组细胞进行Transwell迁移实验和活细胞工作站检测,来评估细胞功能改变。并通过qRT-PCR和Western blotting分别检测两组细胞的EMT相关基因mRNA和蛋白水平表达变化。结果:每1g大鼠胰腺组织,能够获得的PSCs约为:4×106-7×106个,经台酚蓝染色实验鉴定细胞存活率约为90%左右。原代分离48h内的PSCs定义为静止态PSCs,细胞体积小,外观呈圆形或多边形,胞内含有丰富的脂滴,可在320nm波长的激发光下有短暂的自发蓝绿色荧光;超过48h,细胞逐渐激活,外形呈多触角状,胞内脂滴逐渐减少直至消失。与静止态PSCs相比,激活态PSCs细胞迁移和运动能力增强。同时,上皮标记(如E-cadherin、BMP7和Desmoplakin)表达下降,伴随间质标记(如N-cadherin、Vimentin、Fibronectin1、Collagen1α1和S100A4)表达上升,且EMT相关转录因子Snail与Slug也有不同程度的上调。结论:细胞迁移和运动能力增强伴随EMT相关基因表达改变,表明体外静止态的大鼠PSCs活化为激活态的肌成纤维细胞样PSCs这一过程中,发生了类似EMT的改变。此结果促使了我们更好地理解胰腺病理性纤维化的发病机制,并有望为今后诊治慢性胰腺炎和胰腺癌提供有力的理论依据。
【关键词】：胰腺星状细胞(PSCs) 激活 上皮-间质转化(EMT) 胰腺导管腺癌(PDAC) 慢性胰腺炎(CP)
【学位授予单位】：南京医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R576;R735.9
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-9
• 前言9-11
• 材料和方法11-27
• 结果27-36
• 讨论36-38
• 结论38-39
• 参考文献39-45
• 文献综述45-62
• 参考文献55-62
• 附录62-64
• 攻读学位期间发表文章情况64-65
• 致谢65

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本文编号：909947