守宫硫酸糖肽抑制肝癌细胞增殖与迁移的体外研究

发布时间：2017-09-24 15:03

  本文关键词：守宫硫酸糖肽抑制肝癌细胞增殖与迁移的体外研究

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【摘要】：目的:临床上,多数实体恶性肿瘤的硬度高于正常组织,软坚散结是中医治疗恶性肿瘤的重要方法之一。守宫硫酸糖肽是传统软坚散结中药守宫抗肿瘤的主要有效成份。本课题通过守宫硫酸糖肽对肝癌Hep G2细胞的体外研究,探究守宫硫酸糖肽对肝癌Hep G2细胞增殖与迁移的影响并初步探讨其中的机制。方法:1.取肝癌Hep G2细胞,实验设置空白对照组、GSPP低剂量组(20μg/m L)、GSPP中剂量组(100μg/m L)、GSPP高剂量组(200μg/m L)。运用MTS试验观察守宫硫酸糖肽对肝癌Hep G2细胞增殖的影响,并依据不同观察时间点的细胞数绘制细胞生长曲线。2.取肝癌Hep G2细胞,实验分组同上,通过划痕实验和Transwell实验观察守宫硫酸糖肽对Hep G2细胞迁移的影响。并通过免疫荧光法观察不同实验组Hep G2细胞内E-钙粘蛋白,Vimentin以及α-SMA表达情况。3.取肝癌Hep G2细胞,实验分组同上,通过流式细胞术检测Hep G2细胞表面整合素β1表达情况,并通过Western-blot实验检测细胞内E-钙粘蛋白及p-ERK表达情况。同时,运用RT-PCR实验检测细胞内整合素信号通路上Rho,Rac,cdc42,Arp3蛋白的表达情况。结果:1.MTS法探究守宫硫酸糖肽对Hep G2细胞增殖的影响:分别于加药12h,24h,36h,48h测量每组细胞的OD值。结果显示:GSPP高中低剂量组Hep G2增殖的细胞数较空白对照组均明显较少(P0.05),并且高剂量(200μg/m L)组对于增殖的抑制作用最强。2.(1)划痕实验:在加入药物时和加入药物12小时后,分别测量不同组别细胞迁移运动的距离。通过观察图片和测量细胞迁移的距离我们可以看出,三个剂量守宫硫酸糖肽组Hep G2细胞的迁移距离与空白对照组比较,均明显减少(P0.01)。(2)Transwell实验:从穿过Transwell小室膜的细胞数看,GSPP三个剂量组较空白对照组细胞数均明显减少(P0.01)。并且这种抑制迁移的作用呈剂量依赖性。(3)免疫荧光实验观察细胞内E-钙粘蛋白,Vimentin与α-SMA的表达情况:守宫硫酸糖肽三个剂量组与对照组比较,Hep G2细胞内E-钙粘蛋白表达增加,Vimentin与α-SMA表达减少。3.(1)流式细胞术检测Hep G2细胞表面整合素β1蛋白的表达:与空白对照组比较,加入守宫硫酸糖肽的三个剂量组整合素β1的表达均明显减少(P0.05)。(2)通过Western-blot实验观察Hep G2细胞内p-ERK与E-钙粘蛋白的表达情况:守宫硫酸糖肽三个不同剂量组p-ERK蛋白的表达量均明显低于空白对照组,而E-钙粘蛋白的表达量则高于对照组。(3)RT-PCR检测Hep G2细胞内整合素信号通路上蛋白的表达:加药组Hep G2细胞内整合素通路上的Rho,Rac,cdc42,Arp3蛋白表达量均较空白对照组均明显减少(P0.05)。结论:1.守宫硫酸糖肽能够抑制Hep G2细胞的增殖,并且在高剂量(200μg/m L)组抑制作用最强。2.守宫硫酸糖肽能够显著抑制Hep G2细胞的迁移,并且这种抑制作用呈剂量依赖性。3.守宫硫酸糖肽通过抑制肝癌细胞EMT以及ERK磷酸化从而抑制肿瘤的增殖与迁移。4.守宫硫酸糖肽对Hep G2细胞生长与转移的抑制作用,可能是通过抑制整合素信号通路实现的。
【关键词】：守宫硫酸糖肽肝癌 HepG2 细胞增殖迁移整合素通路
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 缩略语/符号说明10-11
• 前言11-14
• 研究现状、成果11-13
• 研究目的、方法13-14
• 一、守宫硫酸糖肽对HepG2增殖与迁移的影响14-27
• 1.1 对象和方法14-20
• 1.1.1 实验设计14
• 1.1.2 实验材料14-15
• 1.1.3 方法步骤15-20
• 1.2 结果20-23
• 1.2.1 守宫硫酸糖肽对肝癌HepG2细胞增殖的影响20
• 1.2.2 守宫硫酸糖肽对肝癌HepG2细胞迁移的影响20-23
• 1.2.3 守宫硫酸糖肽对肝癌HepG2细胞骨架蛋白的影响23
• 1.3 讨论23-26
• 1.3.1 软坚散结法治疗肿瘤的历史沿革23-24
• 1.3.2 软坚散结中药抗肿瘤的物质基础24-25
• 1.3.3 EMT是肿瘤转移的重要步骤25-26
• 1.4 小结26-27
• 二、守宫硫酸糖肽抗HepG2生长与转移机制初探27-40
• 2.1 对象与方法27-34
• 2.1.1 实验设计27
• 2.1.2 实验材料27-28
• 2.1.3 方法步骤28-34
• 2.2 结果34-36
• 2.2.1 守宫硫酸糖肽对HepG2表面整合素 β1 的表达的影响34
• 2.2.2 守宫硫酸糖肽对HepG2细胞内p-ERK,E-钙粘蛋白表达的影响2434-35
• 2.2.3 守宫硫酸糖肽对HepG2细胞内整合素通路上蛋白表达的影响35-36
• 2.3 讨论36-39
• 2.4 小结39-40
• 结论40-41
• 参考文献41-45
• 发表论文和参加科研情况说明45-46
• 综述 中药治疗肿瘤及预防肿瘤转移机制研究进展46-61
• 综述参考文献54-61
• 致谢61-62
• 个人简历62

【参考文献】

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本文编号：912047