去氢厄弗酚通过选择性诱导肿瘤内质网应激和细胞凋亡抑制胃癌细胞生长

发布时间：2017-09-25 04:34

  本文关键词：去氢厄弗酚通过选择性诱导肿瘤内质网应激和细胞凋亡抑制胃癌细胞生长

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【摘要】：目前在世界范围内,胃癌导致的死亡人数已占据癌症导致的死亡人数的第三位,最近几十年内,尽管人们付出了大量的努力,使用诸多药物来治疗胃癌,但在临床上仍然缺乏有效的针对胃癌的治疗方法,胃癌患者的五年生存率仍然低于30%。当代社会,随着人们生活节奏逐步加快,对于健康饮食的关注也越来越缺乏,最终使得病从口入的形势越来越严峻,导致胃癌发生率逐步上升。因此,我们急需一种新型有效的抗胃癌药物。对于中草药抗胃癌作用,至今仍未见报道,那么是否存在一种能够有效抑制胃癌的中药单体呢?这需要我们去逐步研究发掘。我们在对120种中草药的筛选研究中发现,有几种单体在体外可以有效抵抗癌细胞生长。在本课题中,我们研究了一种抗胃癌中草药——灯芯草,并从中发现并提取了活性单体成分去氢厄弗酚(dehydroeffusol,DHE),并获得了国家专利。我们发现DHE这种小分子化合物能够通过诱导肿瘤抑制性内质网应激(ER stress)和触发适度的细胞凋亡(Apoptosis)从而有效地抑制胃癌细胞的增殖和肿瘤的发生。机制研究表明,DHE通过上调转录因子4(ATF4)表达促进内质网应激关键标志物DNA损伤诱导转录因子3(DDIT3)的过表达,进而选择性的激活细胞内肿瘤抑制性内质网应激反应。同时,DHE也通过下调转录因子ATF6的表达抑制了细胞生长及内质网应激标志物葡萄糖调节蛋白分子(GRP78)的表达。另外,DHE明显激活了MEKK4-MKK3/6-p38-DDIT3这条信号通路,同时抑制了Erk通路。通过本项研究我们在国内外首次发现中草药单体去氢厄弗酚(DHE)能够有效抑制胃癌生长,且毒副作用很小。同时揭示了其机制为DHE通过大幅度诱导肿瘤内质网应激反应和适度激活细胞凋亡抑制了肿瘤生长和肿瘤发生。因此,DHE可能成为潜在的抗肿瘤疗法中的新策略。这为抗胃癌治疗提供了新的手段,为中草药在癌症治疗中的研发与应用开辟了道路。
【关键词】：胃癌 内质网应激 去氢厄弗酚 凋亡 p38
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-10
• 一、前言10-12
• 二、材料与方法12-28
• （一）材料与试剂12-14
• 1、细胞系及实验动物12
• 2、药物12
• 3、主要试剂12-13
• 4、主要抗体13
• 5、主要仪器13-14
• （二）方法14-28
• 1、主要试剂配制14-16
• 2、细胞培养与维持16-17
• 3、含DHE培养基配制17
• 4、细胞活力分析17
• 5、克隆形成分析17-18
• 6、细胞周期分析18
• 7、移植瘤实验18-19
• 8、细胞凋亡分析19
• 9、细胞形态学电镜分析19-20
• 10、蛋白免疫印迹分析20-21
• 11、线粒体膜电位分析21
• 12、内质网应激水平分析21
• 13、半定量 PCR21-23
• 14、启动子克隆及重组载体构建23-27
• 14.1 目的片段的引物设计23
• 14.2 引物合成后，以人全基因组为模板进行PCR扩增23-27
• 15、DDIT3基因启动子荧光报告分析27
• 16、数据分析27-28
• 三、结果28-44
• 1、DHE有效地抑制了胃癌细胞生长及其致瘤性28-32
• 2、DHE通过介胃癌细胞内质网应激促进胃癌细胞凋亡32-39
• 3、DHE选择性地激活了MEKK4-MKK3-P38信号通路应激反应39-44
• 四、讨论44-45
• 结论45-47
• 参考文献47-50
• 综述 内质网与线粒体应激介导的肿瘤细胞凋亡50-58
• 参考文献55-58
• 攻读学位期间本人出版或公开发表的论著、论文58-59
• 中英文缩写词表59-60
• 致谢60-62

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本文编号：915391