S1P通过S1PR2抑制癌细胞迁移及其信号通路的研究

发布时间：2017-09-26 07:29

  本文关键词：S1P通过S1PR2抑制癌细胞迁移及其信号通路的研究

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【摘要】：癌症是危及人类健康的重大疾病之一,癌症的发生和发展受许多信号通路的调控。细胞膜上的S1P受体S1PRs(包括S1PR1、S1PR2、S1PR3、 S1PR4 和 S1PR5)能够被S1P激活,介导细胞内多条信号通路,调控细胞的生理功能,如细胞增殖、迁移、凋亡、血管生成等。这些受体是跨膜蛋白,能够与细胞内不同类型的G蛋白偶联,激活下游的信号分子,传递信号。肿瘤细胞具有无限增殖和转移的特性。有研究报道S1PR2能够抑制内皮细胞和黑色素瘤细胞的迁移,还能抑制弥散性B细胞淋巴瘤的产生,可能是一种具有抑癌作用的受体。因此,研究S1PR2在肿瘤细胞迁移中的作用及其信号通路对于肿瘤治疗具有重要的意义。本实验应用Real Time PCR技术检测多种细胞中S1PRs的表达。并选取S1PR2高表达的人胃癌细胞SGC-7901 和 BGC-803细胞,用Micro Chemotaxis Chamber检查了S1P刺激下细胞的迁移,同时用S1PR2的拮抗剂JTE-013预处理细胞后,检测S1PS1P刺激下细胞迁移,探究S1PR2对细胞迁移的影响。克隆了人S1PR2的cDNA,构建了S1PR2过表达载体,转染到S1PR2低表达的人肺癌细胞A549中,成功构建S1PR2过表达细胞模型,并检查S1P刺激下细胞迁移,进一步验证S1PR2对细胞迁移的作用。利用S1PR2高表达的SGC-7901细胞,使用了多种抑制剂(Gi蛋白抑制剂PTX, ERK的抑制剂PD98059, Rho激酶抑制剂Y27632和NF-κB抑制剂BAY)探索S1PR2抑制细胞迁移的信号通路。实验结果显示：在A549、HCT-116、A2780、HO-8910细胞中S1PR3高表达,S1PR2表达量低于S1PR3表达量,在我们检测的胃癌细胞中S1PR2都高表达。用S1P刺激细胞后,细胞的迁移能力下降,当用JTE-013预处理细胞,被S1P抑制的细胞迁移能力得到恢复,证明S1P通过S1PR2抑制了细胞的迁移。当用抑制剂PTX、PD98059、Y27632和BAY处理细胞后,S1P通过S1PR2抑制细胞迁移的作用被解除,说明Gi蛋白、ERK、R ho激酶(ROCK)和NF-κB参与了S1P介导S1PR2抑制细胞迁移的过程。我们的研究结果显示S1PR2具有抑制癌细胞迁移的作用,可能成为癌症治疗的分子靶标。
【关键词】：癌细胞 S1PR2 细胞迁移 信号通路
【学位授予单位】：内蒙古大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.5
【目录】：

• 摘要4-6
• 英文摘要6-11
• 英文缩略词11-12
• 一. 前言12-13
• 二. 材料与方法13-29
• 2.1 材料13-15
• 2.1.1 仪器设备13
• 2.1.2 试剂溶液13-15
• 2.2 方法15-29
• 2.2.1 细胞培养15-17
• 2.2.2 Real time PCR检测S1PRs表达17-20
• 2.2.3 S1PR2 cDNA的克隆及克隆载体的构建20-25
• 2.2.4 S1PR2 cDNA真核表达载体构建25-26
• 2.2.5 S1PR2过表达A549细胞系建立26-28
• 2.2.6 S1PR2在2种胃癌细胞迁移活性中的作用28
• 2.2.7 S1PR2在SGC-7901细胞中抑制细胞迁移的信号通路研究28-29
• 2.2.8 数据分析29
• 三. 结果29-46
• 3.1 细胞中S1PRs的mRNA表达情况29-32
• 3.2 胃癌细胞迁移活性检测32-34
• 3.2.1 SGC-7901细胞迁移活性检测32-33
• 3.2.2 BGC-803细胞迁移活性的检测33-34
• 3.3 人鞘氨醇-1-磷酸2型受体S1PR2真核表达载体的构建34-36
• 3.3.1 人鞘氨醇-1-磷酸2型受体S1PR2的cDNA克隆34
• 3.3.2 重组质粒pMD19-T-S1PR2的双酶切(SalI和BamHI)鉴定34-35
• 3.3.3 重组质粒pMD19-T-S1PR2的测序鉴定35
• 3.3.4 表达载体pIRES2-EGFP的双酶切(SalI和BamHl)35-36
• 3.3.5 重组表达载体pIRES2-EGFP-S1PR2双酶切鉴定36
• 3.3.6 重组质粒pIRES2-EGFP-S1PR2的测序鉴定36
• 3.4 S1PR2过表达A549细胞系的建立36-38
• 3.4.1 A549细胞中转染表达载体pIRES2-EGFP-S1PR2后荧光显微照相36-37
• 3.4.2 Real Time PCR相对定量结果37-38
• 3.5 S1PR2过表达A549细胞迁移活性检测38-40
• 3.6 SGC-7901细胞标准曲线和生长曲线的绘制40-41
• 3.6.1 SGC-7901细胞的标准曲线绘制40
• 3.6.2 SGC-7901细胞生长曲线绘制40-41
• 3.7 S1P/S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的信号通路探究41-46
• 3.7.1 PTX对S1P/S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响41-42
• 3.7.2 PD98059对S1P/S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响42-43
• 3.7.3 Y27632对S1P/S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响43-44
• 3.7.4 BAY对S1P/S1PR2抑制人胃癌细胞SGC-7901细胞迁移的影响44-46
• 四. 讨论46-47
• 五. 结论47-48
• 参考文献48-49
• 文献综述49-56
• 参考文献53-56
• 附录56-60
• 致谢60-61
• 攻读硕士学位期间发表的论文与参与的科研项目61

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1 李瑞娟;S1P通过S1PR2抑制癌细胞迁移及其信号通路的研究[D];内蒙古大学;2015年

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本文编号：922238