肿瘤相关巨噬细胞CGI-58在结肠癌恶性进展中的作用研究

发布时间：2017-09-26 11:25

  本文关键词：肿瘤相关巨噬细胞CGI-58在结肠癌恶性进展中的作用研究

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【摘要】：结直肠癌是一种常见的消化道恶肿瘤,其发病率在其他恶性肿瘤中排名第三[1]。像其他实体瘤一样,肿瘤的发生发展与多种炎性细胞的介导相关,其中也包括了巨噬细胞[2,3]。新近报道称,浸润在肿瘤组织中的巨噬细胞称为肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)[4,5]。肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)活化介导的炎性微环境在肿瘤恶性进展过程中起重要作用。炎性因子促进肿瘤的发展在以往的研究中较多,然而新近研究表明间质细胞的代谢重编程在调节肿瘤生物学中起着至关重要的作用[6-8]。CGI-58,又名ABHD5,是一种新发现的促进脂肪分解的辅酶,广泛表达于人体各个组织器官中。我们在免疫组化和巨噬细胞-结肠癌细胞共培养体系的实验中发现,CGI-58的表达在肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)中是明显升高的。我们运用本实验室巨噬细胞-结肠癌细胞共培养体系,特异性敲低巨噬细胞CGI-58和过表达巨噬细胞CGI-58,并运用体内和体外实验证明了巨噬细胞CGI-58在结肠癌细胞增殖、凋亡和侵袭能力的影响,揭示了巨噬细胞CGI-58对结肠癌恶性进展的影响。同时我们进一步用Western blot和Real-time PCR法来探讨其可能的机制,发现巨噬细胞在CGI-58缺失的情况下,可抑制FOXO1的磷酸化,进而增强其转录活性,促进IL-1β的表达。我们的研究以肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)脂质代谢异常为切入点,率先解析肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)CGI-58在慢性炎症和结肠癌恶性进展的中的作用,研究结果对于从肿瘤微环境角度寻找结肠癌的有效防治策略有重要指导意义。目的:研究肿瘤相关巨噬细胞在CGI-58在结肠癌恶性进展中所起的作用。方法:1.CGI-58在肿瘤相关巨噬细胞中的表达为了研究结肠癌中的脂代谢重编程与肿瘤相关巨噬细胞的关系,我们运用免疫组化的方法来检测人类结肠癌及癌旁组织和小鼠结肠癌及癌旁组织,并根据Remmele和stegner提出的免疫反应评分(Immunoreactive Score简称IRS)来评价免疫组化染色的情况,观察CGI-58在肿瘤相关巨噬细胞的表达情况。在细胞水平上,我们运用小鼠结肠癌细胞系CT26和MC38的条件上清液来处理巨噬细胞RAW2647,并用正常培养基处理的raw2647来做对照,用westernblot和realtimepcr法来检测不同处理条件下cgi-58的表达情况。2.肿瘤相关巨噬细胞cgi-58促进结肠癌细胞的恶性进展为了进一步研究肿瘤相关巨噬细胞cgi-58在结肠癌进展中的作用,我们采用慢病毒介导的基因稳定敲低或升高raw264.7中的cgi-58表达,westernblot分析实验结果及使用药物进行稳定转染细胞株的筛选,以获得稳定的细胞克隆株。在体外实验中,分别用收取巨噬细胞条件培养基、巨噬细胞cgi-58敲低组条件培养基和巨噬细胞cgi-58过表达组条件培养基来处理小鼠结肠癌细胞ct26,并分别运用cck-8、细胞周期、细胞凋亡annexinvfitc、克隆形成实验来检测肿瘤相关巨噬细胞cgi-58是否影响结肠癌的进展。体内实验中,我们将babl/c小鼠用ct26细胞系接种上皮下瘤,并分别用巨噬细胞条件培养基和巨噬细胞cgi-58敲低组条件培养基、巨噬细胞条件培养基和巨噬细胞条件培养基巨噬细胞cgi-58高表达组条件培养基来皮下注射瘤周,并观察肿瘤的大小。3.巨噬细胞cgi-58促进结肠癌细胞恶性增殖的机制初探。我们将巨噬细胞cgi-58高表达组、巨噬细胞cgi-58缺失组、正常巨噬细胞组及加入foxo1的抑制as1842856剂处理的巨噬细胞组,利用westernblot和realtimepcr法来检测巨噬细胞cgi-58对il-1β和foxo1的表达调控。结论:1.在免疫组化实验中,cgi-58的表达量在肿瘤相关巨噬细胞atms中明显地高于癌旁巨噬细胞。用小鼠结肠癌细胞系ct26、mc38条件培养基处理的巨噬细胞与正常培养基处理的巨噬细胞比较,其cgi-58的表达水平更高。我们得出结论cgi-58的表达在肿瘤相关巨噬细胞tams中升高的,cgi-58可能在脂质聚集较多的tams起到了分解作用。2.巨噬细胞cgi-58敲低条件培养基处理小鼠结肠癌细胞ct26,较巨噬细胞条件培养基,其肿瘤细胞增殖明显降低、细胞周期的g1期增加、克隆形成率较低,而巨噬细胞cgi-58高表达组结果相反。在皮下瘤瘤模型中,我们统计发现用巨噬细胞cgi-58敲低组条件培养基处理的皮下瘤体积较对照巨噬细胞条件培养基处理组小,小鼠的存活率更高。我们可以得出结论,肿瘤相关巨噬细胞cgi-58缺失的情况下可以抑制结肠癌的恶性进展。3.巨噬细胞cgi-58敲低组较之对照组,il-1β表达明显上调,foxo1的磷酸化水平降低,提示FOXO1转录激活;而先前研究表明,FOXO1可调控IL-1β的转录表达,因此我们推测CGI-58缺失可能通过激活FOXO1蛋白转录活性而促进IL-1β的mRNA水平。而在肿瘤相关巨噬细胞中,CGI-58表达升高,我们猜测:CGI-58/FOXO1通路可介导M2型巨噬细胞形成,发挥促瘤效应。
【关键词】：肿瘤相关巨噬细胞 结肠癌 CGI-58
【学位授予单位】：第三军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.35
【目录】：

• 缩略语表4-5
• 英文摘要5-8
• 中文摘要8-11
• 第一章 前言11-13
• 第二章 CGI-58在肿瘤相关巨噬细胞中的表达升高13-24
• 2.1 材料与方法13-21
• 2.2 结果21-23
• 2.3 讨论23-24
• 第三章 肿瘤相关巨噬细胞CGI-58升高促进结肠癌细胞的恶性增殖24-34
• 3.1 材料与方法24-27
• 3.2 结果27-32
• 3.3 讨论32-34
• 第四章 巨噬细胞CGI-58促进结肠癌细胞恶性增殖的机制初探34-39
• 4.1 材料与方法34
• 4.2 结果34-37
• 4.3 讨论37-39
• 全文结论39-40
• 参考文献40-44
• 文献综述 肿瘤相关巨噬细胞在结直肠癌中的作用44-51
• 参考文献49-51
• 攻读硕士期间发表论文情况51-52
• 致谢52

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1 ;豚鼠巨噬细胞经P_(204)处理后的抗石英细胞毒作用[J];国外医学参考资料(卫生学分册);1976年04期

2 邓侠进;;巨噬细胞的抗癌作用[J];遵义医学院学报;1979年02期

3 陆天才;;疾病对肺巨噬细胞的影响[J];煤矿医学;1982年01期

4 郭瑞清;祝彼得;;一种分离巨噬细胞的简单方法[J];滨州医学院学报;1990年02期

5 谢志坚;巨噬细胞异质性[J];医学综述;2001年06期

6 饶艳;运动及神经内分泌对巨噬细胞功能的调节[J];体育与科学;2002年05期

7 朱金元;;吸烟对肺巨噬细胞的影响[J];浙江医学教育;2003年01期

8 张俊峰;过氧化物酶体增殖物激活受体与单核/巨噬细胞系[J];医学综述;2004年03期

9 韦锦学;顾军;;巨噬细胞的激活诱导死亡[J];生命科学;2006年02期

10 李晓曦;郭宁;曹雪涛;;肿瘤相关巨噬细胞促进肿瘤生长与转移的研究现状[J];中国肿瘤生物治疗杂志;2008年01期

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1 史玉玲;王又明;丰美福;;巨噬细胞激活作用的研究[A];中国细胞生物学学会第五次会议论文摘要汇编[C];1992年

2 吴国明;周辉;;巨噬细胞和创伤纤维化[A];2009年浙江省骨科学学术年会论文汇编[C];2009年

3 李奇;王海杰;;透明质酸对于淋巴结巨噬细胞运动的影响[A];解剖学杂志——中国解剖学会2002年年会文摘汇编[C];2002年

4 刘革修;欧大明;刘军花;黄红林;廖端芳;;丙丁酚在体外能抑制巨噬细胞脂质氧化介导的低密度脂蛋白氧化并调节氧化巨噬细胞的分泌功能[A];面向21世纪的科技进步与社会经济发展（下册）[C];1999年

5 叶金善;杨丽霞;郭瑞威;;环氧化酶-2/前列腺素E_2在血管紧张素Ⅱ刺激巨噬细胞表达细胞外基质金属蛋白酶诱导因子中的作用[A];第十三次全国心血管病学术会议论文集[C];2011年

6 秦帅;陈希;孔德明;;构建由绿色荧光标记巨噬细胞的转基因斑马鱼系[A];贵州省中西医结合内分泌代谢学术会论文汇编[C];2012年

7 武剑华;徐惠绵;;肿瘤相关巨噬细胞在胃癌中的相关研究[A];第9届全国胃癌学术会议暨第二届阳光长城肿瘤学术会议论文汇编[C];2014年

8 何军;;血凝素样氧化型低密度脂蛋白受体升高巨噬细胞内胆固醇水平[A];中华医学会第11次心血管病学术会议论文摘要集[C];2009年

9 宋盛;周非凡;邢达;;PDT诱导的凋亡细胞对巨噬细胞NO合成的影响[A];第七届全国光生物学学术会议论文摘要集[C];2010年

10 张磊;朱建华;黄元伟;姚航平;;血管紧张素Ⅱ对巨噬细胞(THP-1重细胞)凝集素样氧化低密度脂蛋白受体表达的影响[A];浙江省免疫学会第五次学术研讨会论文汇编[C];2004年

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1 通讯员 李静 记者 胡德荣;恶性肿瘤巨噬细胞未必皆“恶人”[N];健康报;2014年

2 兰克;以尝试用巨噬细胞治瘫痪[N];科技日报;2000年

3 薛佳;免疫系统——人体的“卫士”[N];保健时报;2009年

4 记者 胡德荣;铁泵蛋白“维稳”铁代谢作用首次阐明[N];健康报;2011年

5 侯嘉 何新乡;硒的神奇功能[N];中国食品质量报;2003年

6 唐颖 倪兵 陈代杰;巨噬细胞泡沫化抑制剂研究快步进行[N];中国医药报;2006年

7 刘元江;新发现解释肿瘤为何易成“漏网之鱼”[N];医药经济报;2007年

8 本报记者 侯嘉 通讯员 何新乡;今天你补硒了吗[N];医药经济报;2003年

9 左志刚;升血小板药使用注意[N];医药养生保健报;2007年

10 记者 许琦敏;“铁泵”蛋白帮助回收铁元素[N];文汇报;2011年

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2 章桂忠;TIPE2蛋白调控细胞增殖和炎症的机制研究[D];山东大学;2015年

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5 周兴;基于酵母微囊构建新型口服巨噬细胞靶向递送系统的研究[D];第三军医大学;2015年

6 蒋兴伟;Tim-3对巨噬细胞极化的调控机制研究[D];中国人民解放军军事医学科学院;2015年

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9 李美玲;双酚A对小鼠腹腔巨噬细胞极化影响的体外研究[D];安徽医科大学;2015年

10 刘琼;黄芪多糖影响巨噬细胞向脂肪细胞趋化的作用及机制研究[D];新乡医学院;2015年

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本文编号：923232