CAL-101联合BTZ杀伤套细胞淋巴瘤细胞的机制探讨

发布时间：2017-09-26 22:27

  本文关键词：CAL-101联合BTZ杀伤套细胞淋巴瘤细胞的机制探讨

  更多相关文章： 套细胞淋巴瘤 CAL-101 硼替佐米 协同 增殖 凋亡

【摘要】：目的:探索新药PI3K-p110σ抑制剂CAL-101联合硼替佐米(Bortezomib,BTZ)对人套细胞淋巴瘤(mantle celllymphoma,MCL)细胞株增殖和凋亡的影响,并研究联合作用的可能机制,以期为新药CAL-101在套细胞淋巴瘤的临床应用提供理论基础。方法:1.用不同浓度的CAL-101(10μmol/L、20μmol/L、40μmol/L、80μmol/L、100μmol/L)和BTZ(0.02、0.04、0.08、0.16、0.32μmol/L)分别处理套细胞淋巴瘤细胞株HBL-2、Jeko-1和Z138细胞24、48、72小时,用四甲基偶氮唑(methylthiazolyldiphenyl-tetrazolium bromide,MTT)法计算出细胞增值抑制率;2.应用SPSS13.0软件分别计算两药的IC50值;3.设计协同实验:将细胞分为对照组(未加任何药物)、CAL-101组(加入20%、40%、60%、80%和100%CAL-101的IC50值)、BTZ组(20%、40%、60%、80%和100%BTZ的IC50)和CAL-101+BTZ组(CAL-101和BTZ的浓度同单药组),分别处理三种套细胞淋巴瘤细胞株HBL-2、Jeko-1和Z138细胞48小时;4.应用协同分析软件CalcuSyn software(Biosoft,Ferguson,MO,美国)软件分析协同指数(CI);5.Western Blot检测蛋白PI3K-p110σ在3种细胞株的表达情况;6.Western Blot检测不同浓度的CAL-101处理3种细胞株后AKT、ERK、p-AKT、p-ERK的变化;7.用anexinV-FITC/PI流式细胞术检测这4组的细胞凋亡率;8.并用TransaM NF-κB p65转录因子试剂盒检测这4组的NF-κB p65的活性;9.Western Blot检测p-AKT及Caspase-3蛋白的表达水平。结果:1.单药CAL-101可抑制Z138、HBL-2和Jeko-1细胞增殖:10μmol/L、20μmol/l、40μmol/l、80μmol/l、100μmol/l的cal-101作用于z138细胞48小时的抑制率分别为:(17±1.2)%、(27±3.6)%、(41±3.6)%、(55±0.2)%、(62±3.5)%,作用于hbl-2的48小时抑制率为:(20±0.4)%、(35±0.2)%、(43±0.3)%、(53±0.6)%、(59±0.2)%,作用于jeko-1的48小时抑制率为(15±1.4)%、(27±2.7)%、(38±3.8)%、(47±0.7)%、(59±0.1)%;2.单药cal-101处理z138、hbl-2和jeko-1的48小时的ic50分别:56.957±0.6364、62.99±0.57003、77.82±0.65339,btz单药作用于z138、hbl-2和jeko-1细胞48h的ic50分别为:(0.7±0.8)μmol/l、(1.4±0.3)μmol/l和(1.5±0.4)μmol/l;3.协同实验:cal-101组(加入18、36、54、72和90μmol/lcal-101)、btz组(加入0.06、0.12、0.18、0.24和0.30μmol/lbtz)和cal-101+btz组(cal-101和btz的浓度同单药组)处理3种mcl细胞株。80%ic50值处理z138细胞48小时后,此三组的增殖抑制率分别为:(38.5±1.4)%、(35.6±5.1)%、(58.1±6.1)%;对hbl-2细胞的增殖抑制率分别为(42.3±1.2)%、(35.7±1.6)%、(67.3±3.3)%;对jeko-1细胞的增殖抑制率分别为(33.2±1.2)%、(36.0±1.1)%、(56.5±2.9)%;4.calcusynsoftware软件分析结果为cal-101联合btz两药有协同抑制增值作用(ci1);5.westernblot检测发现hbl-2、jeko-1、z138细胞均表达pi3k-p110σ;6.不同浓度的cal-101处理z138、hbl-2、jeko-1细胞后p-akt、p-erk蛋白表达量随药物浓度的增加而降低,akt、erk无明显变化;7.cal-101联合btz的可协同促进mcl细胞的凋亡:经药物处理48h后,对照组、cal-101组、btz组和cal-101+btz组对z138细胞的凋亡率为:(2.6±1.8)%、(40.0±3.0)%、(34.0±1.0)%和(67.4±1.0)%,经药物处理96h后,此四组对hbl-2细胞的凋亡率分别为(7.4±0.6)%、(30.7±5.7)%、(12.0±1.0)%和(85.0±4.0)%,(p0.01);8.cal-101联合btz能进一步抑制nf-κb的活性:z138细胞经对照组、cal-101组、btz组和cal-101+btz组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(43.3±1.2)%、(43.2±1.2)%、(22.2±0.6)%;hbl-2细胞经四组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(35.7±0.4)%、(36.8±1.0)%、(23.1±1.3)%;jeko-1细胞经四组处理后nf-κb蛋白的表达量分别为1.0、(46.1±1.0)%、(54.2±0.5)%、(22.5±0.5)%(P0.05);9.Western Blot证实:CAL-101联合BTZ可显著抑制AKT磷酸化(P0.05);CAL-101联合BTZ可使凋亡蛋白Casepase-3裂解片段表达水平升高(P0.05)。结论:PI3K/AKT和ERK信号通路在MCL肿瘤细胞中被异常激活,从而使肿瘤细胞获得无限增殖、侵袭和耐药的能力。因此抑制PI3K/AKT和ERK信号通路中的关键蛋白分子的活性,关闭或减弱此信号通路的传导,最终可抑制肿瘤细胞的无限增殖、侵袭和耐药的能力。本研究证实CAL-101对套细胞淋巴瘤有毒性作用,当联合BTZ时细胞毒性作用增强,可能是CAL-101可通过抑制PI3K/AKT信号通路的活化,增强了肿瘤细胞对BTZ的敏感性,另一方面,PI3K/AKT、NF-κB信号通路关闭或消弱后,裂解的Caspase-3表达量上调,促进肿瘤细胞凋亡,抑制增殖。当然,这种联合作用还有待于今后临床实验的进一步证实。
【关键词】：套细胞淋巴瘤 CAL-101 硼替佐米 协同 增殖 凋亡
【学位授予单位】：天津医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.1
【目录】：

• 中文摘要4-7
• Abstract7-12
• 缩略语/符号说明12-13
• 前言13-17
• 研究现状、成果13-15
• 研究目的、方法15-17
• 一、CAL-101单药或联合BTZ对套淋巴瘤细胞增殖影响17-23
• 1.1 材料、试剂与仪器17-19
• 1.1.1 细胞系17
• 1.1.2 主要实验试剂17
• 1.1.3 主要实验仪器17-18
• 1.1.4 主要试剂配置18-19
• 1.2 实验方法19-21
• 1.2.1 细胞复苏、培养、传代与冻存19
• 1.2.2 细胞抑制率测定19-21
• 1.2.3 统计学分析21
• 1.3 结果21-23
• 1.3.1 CAL-101单药或联合BTZ对Z138、HBL-2 和Jeko-1 细胞增殖的影响21-23
• 二、CAL-101联合BTZ细胞毒作用的机制探讨23-33
• 2.1 材料、试剂与仪器23-24
• 2.1.1 细胞系23
• 2.1.2 主要实验试剂23
• 2.1.3 主要实验仪器23-24
• 2.1.4 主要试剂配制24
• 2.2 实验方法24-28
• 2.2.1 细胞复苏、培养、传代与冻存25
• 2.2.2 Western blot法检测细胞中PI3K/Akt和ERK通路蛋白的表达25-27
• 2.2.3 流式细胞术检测细胞凋亡27
• 2.2.4 酶联免疫吸附法测细胞中核因子κB（NF-kB）27-28
• 2.2.5 Western blot法检测细胞中p-Akt和caspase-3 蛋白的表达28
• 2.2.6 统计学方法28
• 2.3 结果28-33
• 2.3.1 CAL-101联合BTZ的可协同促进MCL细胞的凋亡28-30
• 2.3.2 CAL-101抑制PI3K/AKT和ERK信号通路的活化30
• 2.3.3 CAL-101联合BTZ可显著抑制AKT磷酸化30-31
• 2.3.4 CAL-101联合BTZ可明显抑制NF-κB的活性31-32
• 2.3.5 CAL-101联合BTZ可促进凋亡蛋白caspase-3 的表达32-33
• 讨论33-38
• 结论38-39
• 参考文献39-51
• 发表论文和参加科研情况说明51-52
• 综述52-69
• 综述参考文献60-69
• 致谢69

【共引文献】

中国期刊全文数据库 前8条

1 姚远;易平勇;刘晰宇;周芳;孙中义;欧阳周;贺军侨;黄利军;;自体外周血造血干细胞移植联合大剂量化疗治疗套细胞淋巴瘤的临床观察[J];肿瘤药学;2014年01期

2 曾郁;易祥华;梁军;吴运瑾;肖立;丁懿;;多形性母细胞型套细胞淋巴瘤1例并文献复习[J];临床与实验病理学杂志;2013年12期

3 刘耀;张曦;;套细胞淋巴瘤的治疗现状及进展[J];临床荟萃;2014年10期

4 曹利红;金洁;;套细胞淋巴瘤预后分层[J];中国实用内科杂志;2015年02期

5 熊竹娟;周祥;吴萍;周进;魏雯;敬小梅;任苑蓉;李力;张智慧;;21例套细胞淋巴瘤临床治疗及预后分析[J];肿瘤预防与治疗;2015年04期

6 刘雪花;龚玉萍;;套细胞淋巴瘤的研究进展[J];中华临床医师杂志(电子版);2013年20期

7 李四强;侯忠赤;宫超;;Hyper-CVAD/MA化疗方案临床应用的研究进展[J];医学综述;2014年03期

8 王芳;张新伟;张翼澾;魏枫;任秀宝;;FDCs-miR-548m-CDK6轴在套细胞淋巴瘤集落形成中的研究[J];中国肿瘤临床;2014年18期

中国博士学位论文全文数据库 前1条

1 金雪立;B淋巴细胞激活因子BAFF及其特异性受体BAFF-R在非霍奇金B细胞淋巴瘤中的作用、作用机制和临床意义的研究[D];浙江大学;2015年

，

本文编号：926077