ERK对子宫颈癌细胞中核转录因子表达的调节作用

发布时间：2017-09-27 21:21

  本文关键词：ERK对子宫颈癌细胞中核转录因子表达的调节作用

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【摘要】：目的:HPV感染是子宫颈癌发生的主要病因但并非唯一因素。近年来研究发现,丝裂原活化蛋白激酶(MAPKs)信号通路在细胞恶性转化和肿瘤浸润转移过程中起着重要作用。细胞外信号调节激酶(ERK)作为MAPK家族的主要成员,可通过一系列级联转导系统将信号由细胞外传导进入细胞核并且磷酸化多种核转录因子,促进相关癌基因的表达。研究显示,在子宫颈癌中,ERK的表达率随着宫颈病变的加重呈增高趋势,但其机制不明。本研究通过细胞实验研究方法,旨在探讨ERK在子宫颈癌细胞中对核转录因子的调控作用以及对子宫颈癌细胞生物学功能的影响,进而解释ERK在子宫颈癌发生中的可能机制。方法:选取HPV16阳性的Siha和HPV阴性的C33A子宫颈癌细胞进行传代培养,向两种细胞施加抑制剂U0126,建立ERK抑制体系,形成对照组和干预组。采用活细胞计数法检测细胞生长情况;采用CCK-8法检测细胞活性;采用流式细胞术检测细胞周期及凋亡情况;采用实时荧光定量PCR(Real-time PCR)法和Western-blot法检测相关核转录因子的m RNA及蛋白的表达情况表达水平;数据采用SPSS17.0软件进行统计学分析。结果:1、Siha和C33A子宫颈癌细胞一般生物学特征的比较:除24小时外,两种细胞数在其他时间点的差异均有统计学意义(P0.05);Siha细胞增殖指数(PI)高于C33A细胞(t=5.342,P0.001);C33A细胞凋亡率高于Siha细胞(t=-2.986,P=0.024)。2、Siha和C33A子宫颈癌细胞ERK1/2、hn RNP E1、c-Fos、c-Jun的表达:(1)Siha细胞ERK1 m RNA相对表达量明显低于C33A细胞(t=-17.489,P0.001),Siha细胞ERK1/2和p-ERK1/2的蛋白表达水平均高于C33A细胞(ERK1/2:t=16.309,P0.001;p-ERK1/2:t=4.776,P=0.028)。(2)Siha细胞hn RNP E1 m RNA相对表达量高于C33A细胞(t=3.376,P0.001);Siha细胞hn RNP E1蛋白相对表达量高于C33A细胞(t=4.821,P0.001)。(3)Siha细胞c-Fos m RNA相对表达量高于C33A细胞(t=3.590,P=0.013),Siha细胞c-Fos蛋白表达水平低于C33A细胞(t=-1.337,P=0.184);Siha细胞p-c-Fos蛋白表达水平高于C33A细胞(t=3.029,P=0.004)。(4)c-Jun基因m RNA及蛋白表达比较:Siha细胞的c-Jun m RNA相对表达量高于C33A细胞(t=4.713,P0.001);Siha细胞p-c-Jun蛋白表达水平高于C33A细胞(t=10.209,P0.001)。3、ERK对Siha和C33A子宫颈癌细胞一般生物学特征的影响:(1)ERK抑制效果评价:C33A细胞ERK2 m RNA的抑制率为56.89±3.08%,高于Siha细胞的54.08±4.05%,但差异无统计学意义(t=1.004,P=0.107),C33A细胞ERK1/2蛋白的抑制率为63.16±7.24%,高于Siha细胞的51.32±6.51%,差异有统计学意义(t=-4.281,P=0.007),两种细胞均达到了较好的抑制效果。(2)与对照组相比,两种细胞干预组的增殖指数均降低(Siha:t=6.863,P0.001;C33A:t=7.092,P0.001),Siha细胞干预组增殖指数高于C33A细胞干预组(t=7.066,P0.001)。(3)与对照组相比,两种细胞干预组的凋亡率均增加,(Siha:t=-5.201,P=0.006;C33A:t=-4.335,P=0.005);C33A细胞干预组凋亡率高于Siha细胞干预组,但差异无统计学意义(t=-2.431,P=0.057)。4、ERK对Siha和C33A子宫颈癌细胞hn RNP E1、c-Fos、c-Jun表达的影响:(1)与对照组相比,Siha细胞干预组hn RNP E1 m RNA相对表达量降低(t=2.407,P0.001),Siha细胞hn RNP E1 m RNA的抑制率高于C33A细胞(t=-12.073,P0.001);Siha细胞干预组hn RNP E1蛋白表达水平低于对照组(t=2.539,P=0.004),Siha细胞干预组与C33A细胞干预组hn RNP E1蛋白表达水平的差异有统计学意义(t=2.132,P=0.017),Siha细胞hn RNP E1蛋白的抑制率高于C33A细胞(t=2.967,P=0.039)。(2)与对照组相比,Siha细胞干预组c-Fos m RNA相对表达量降低(t=4.129,P0.001),Siha细胞c-Fos m RNA的抑制率高于C33A细胞(t=14.697,P0.001);与对照组相比,两种细胞干预组p-c-Fos蛋白表达水平均降低(Siha:t=2.753,P=0.038;C33A:t=2.547,P=0.041);Siha细胞干预组p-c-Fos蛋白表达水平高于C33A细胞干预组(t=2.910,P0.001)。(3)与对照组相比,Siha细胞干预组c-Jun m RNA相对表达量降低(t=4.037,P0.001),Siha细胞c-Jun m RNA的抑制率高于C33A细胞(t=9.260,P0.001);Siha细胞干预组c-Jun蛋白表达水平降低(t=2.059,P=0.017);Siha细胞干预组c-Jun蛋白表达水平低于C33A细胞干预组(t=-2.917,P0.001);与对照组相比,Siha细胞干预组p-c-Jun蛋白表达水平降低(t=4.209,P0.001);Siha细胞干预组p-c-Jun蛋白表达水平高于C33A细胞干预组(t=3.106,P=0.002),Siha细胞p-c-Jun蛋白的抑制率高于C33A细胞(t=11.734,P0.001)。结论:1、ERK的活化可以降低子宫颈癌细胞的凋亡,有促进其增殖分化作用,ERK的活化和HPV感染在促子宫颈癌细胞生长过程中可能存在协同作用。2、ERK可以上调子宫颈癌细胞中hn RNP E1的表达,进而促进子宫颈癌细胞生长,HPV感染可能协同参与了ERK对hn RNP E1的上调作用。3、ERK可以激活c-Fos、c-Jun并促进其磷酸化,进而促进子宫颈癌细胞生长,HPV感染可能协同参与了ERK对c-Fos、c-Jun的激活。
【关键词】：ERK 子宫颈癌细胞 转录因子 调节作用
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.33
【目录】：

• 摘要5-8
• Abstract8-12
• 常用缩写词中英文对照表12-13
• 前言13-16
• 1 材料与方法16-30
• 1.1 实验材料16-20
• 1.2 实验方法20-28
• 1.3 资料整理和分析28
• 1.4 质量控制28-30
• 2 结果30-47
• 2.1 Siha与C33A子宫颈癌细胞一般生物学特征的比较30-32
• 2.2 Siha与C33A子宫颈癌细胞核转录因子的表达32-34
• 2.3 ERK抑制体系的建立34-37
• 2.4 ERK 对两种子宫颈癌细胞生物学功能及核转录因子表达的影响37-47
• 3 讨论47-51
• 3.1 ERK对子宫颈癌细胞生物学特征的影响47-48
• 3.2 ERK对子宫颈癌细胞hnRNP E1 表达的影响48-49
• 3.3 ERK对子宫颈癌细胞c-Fos、c-Jun表达的影响49-51
• 4 结论51-52
• 参考文献52-56
• 综述56-65
• 参考文献60-65
• 致谢65-66
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果66-67
• 个人简历67

【参考文献】

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本文编号：931957