胰腺癌Panc-1细胞中miR-103a-3p靶向作用Dicer1基因的研究

发布时间：2017-09-27 22:36

  本文关键词：胰腺癌Panc-1细胞中miR-103a-3p靶向作用Dicer1基因的研究

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【摘要】：目的:微小RNA(micro RNA,mi RNA)与肿瘤的发生发展关系密切,其主要通过与靶基因m RNA的3’UTR结合进而导致m RNA降解或抑制m RNA翻译,最终促进或抑制肿瘤的发生发展。本实验中我们通过寻找mi R-103a-3p的潜在靶基因,并验证mi R-103a-3p与潜在靶基因在胰腺癌细胞株Panc-1中的靶向关系。在此基础上进一步探讨mi R-103a-3p调节其靶基因表达的作用方式,为下一步体内实验奠定基础,同时也为寻求胰腺癌有效的治疗靶点提供理论依据。方法:1.利用靶基因预测软件并结合相关因素分析,筛选出Dicer1可能为mi R-103a-3p的靶基因;2.利用双荧光素酶报告基因技术,验证mi R-103a-3p与Dicer1基因的靶向关系;3.构建mi R-103a-3p inhibitor转染成功的胰腺癌细胞Panc-1并检验转染效率;4.利用实时荧光定量PCR及Western Blot技术分别检测mi R-103a-3p和Dicer1的表达,从功能上验证mi R-103a-3p对Dicer1基因的调控关系。结果:1.通过八个数据库预测mi R-103a-3p作用的靶基因,结果显示Dicer1预测值较高,在八个数据库预测中都存在靶向关系,且Dicer1在胰腺癌中研究较为成熟,因此,选定了Dicer1作为mi R-103a-3p靶基因的验证对象;2.基因测序结果表明,携带Dicer1基因3’-UTR序列的GV306报告基因载体构建成功,与mi R-103a-3p inhibitor共转染细胞后,荧光素酶活性较对照组明显上升(P0.05);3.Panc-1胰腺癌细胞转染mi R-103a-3p inhibitor后,Panc-1细胞中mi R-103a-3p的表达水平明显下降(P0.05);4.在Panc-1细胞中,mi R-103a-3p浓度与Dicer1的m RNA水平无明显相关性,而与Dicer1蛋白表达水平呈负相关。结论:1.Dicer1基因是mi R-103a-3p的靶基因,其3’-UTR序列中存在mi R-103a-3p的作用靶点;2.通过瞬时转染mi R-103a-3p inhibitor,成功构建低表达mi R-103a-3p的Panc-1细胞系;3.在胰腺癌Panc-1细胞中,mi R-103a-3p在转录后水平调节Dicer1基因的表达。
【关键词】：mi R-103a-3p Dicer1 胰腺癌 靶基因
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.9
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-9
• 中英文缩略词9-10
• 第1章 引言10-14
• 第2章 材料与方法14-31
• 第3章 实验结果31-40
• 第4章 讨论40-44
• 第5章 结论44-46
• 参考文献46-50
• 综述50-60
• 参考文献57-60
• 科研成果60
• 论文受以下基金项目资助60-61
• 致谢61

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本文编号：932343