SM-164联合多柔比星（ADM）对人骨肉瘤U-2细胞增殖及凋亡的影响

发布时间：2017-09-27 23:02

  本文关键词：SM-164联合多柔比星（ADM）对人骨肉瘤U-2细胞增殖及凋亡的影响

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【摘要】：背景及目的:Smac作为一种新型线粒体蛋白质,自从2000年7月由Du等[16]首次报道以来作为一种新型抗癌药物得以被广泛研究,SM-164作为Smac蛋白的一种亚型,其抗癌效果更为显著,同时,有多篇报导显示,在体内外试验中,SM-164对人类多种类型肿瘤细胞有明确的抗肿瘤活性,包括前列腺癌,结肠癌,乳腺癌,卵巢癌以及恶性黑色素瘤等[21,25]。本文旨在探究SM-164单药以及联合盐酸盐多柔比星(ADM)对骨肉瘤U-2-OS的增值抑制和凋亡的作用,为进一步探讨其作用机制和可能的信号转导途径,以及SM-164作为一种新型化疗生物制剂用于人骨肉瘤(OS)治疗的可能性。方法:(1)MTT法检测SM-164单药及联合盐酸多柔比星(ADM)对U-2-OS细胞的增殖抑制作用。1)检测不同浓度梯度的SM-164分别单独处理U-2-OS细胞24小时后,U-2-OS的增殖抑制作用,并绘制生长曲线;2)根据前期浓度梯度实验,SM-164作用浓度分别设定为100nM、200nM,而ADM的作用浓度则分别设定为临床用药浓度0.5μg/mL和临床半量浓度0.25μg/mL,分九组:单药SM164-100nM组、SM164-200nM组、单药ADM0.25μg/mL组、ADM0.5μg/mL组、联合用药(SM164-100nM+ADM0.25μg/mL)组、联合用药(SM164-100nM+ADM0.5μg/mL)组、联合用药(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)组以及联合用药(SM164-200nM+ADM0.25μg/mL)组和对照组。(2)Hoechst染色检测U-2细胞凋亡。分别设置对照组、实验组1(ADM0.25/0.5μg/ml)、实验组2(ADM0.25/0.5μg/ml+SM164-100 nM)。(3)流式细胞仪检测ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)联合SM-164(100nM)诱导U-2细胞凋亡。结果:(1)MTT实验显示:1)当不同浓度梯度(1nM、10nM、50nmol/L、100nM、200 nM、500nM、1μmol/L)的SM-164分别单独处理U-2-OS细胞24小时后,U-2-OS的增殖受到抑制,并随着SM-164剂量的增加抑制程度逐渐增强,但抑制效果并不显著,对U-2细胞存活率没有显著的改变(详见表1,图1);2)SM-164(100nM/200nM)联合ADM(0.25/0.5μg/mL)比单独使用相同浓度的ADM对U-2-OS抑制率均明显加强,两者均表现明显协同效应(详见表2,图2)。(2)Hoechst染色显示:对照组(不加药),其视野内U-2细胞与加药组相比数量虽然较多,但只有很微弱的蓝色荧光;ADM(0.25/0.5μg/mL)组视野内细胞数量有所减少,可见少量蓝色荧光;ADM(0.25/0.5μg/mL)+SM-164(100nM)组视野内U-2细胞致密浓染,清晰可见大量且较强蓝色荧光,提示该组药物促U-2-OS凋亡效果显著。(3)流式细胞仪检测显示:单独用ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)处理U-2细胞24小时,其凋亡率为(8.53±2.41)%、(12.2±3.11)%;SM-164-100nM处理U-2细胞24小时后,其凋亡率为(6.03±2.01)%;将SM-164-100nM联合盐酸多柔比星ADM(0.25μg/mL、0.5μg/mL)处理U-2 OS 24小时,其凋亡率分别为(36.4±3.68)%、(50.2±5.19)%,SM-164可促进U-2细胞凋亡。结论:1)SM-164单药对U-2-OS增殖抑制作用有限,但是SM-164联合ADM对U-2-OS有明显的增殖抵抗作用,且协同效应十分显著;2)SM-164能明显加强盐酸多柔比星(ADM)诱导U-2-OS的凋亡,在诱导凋亡方面二者协同作用同样显著。
【关键词】：U-2细胞 SM-164 盐酸多柔比星(ADM) 增殖抑制 细胞凋亡 IAPS
【学位授予单位】：南昌大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.1
【目录】：

• 摘要3-5
• ABSTRACT5-10
• 第1章 前言10-13
• 第2章 材料和方法13-20
• 2.1 实验材料13-14
• 2.1.1 细胞来源13
• 2.1.2 主要试剂与材料13
• 2.1.3 主要仪器与设备13-14
• 2.1.4 常用试剂的配置14
• 2.2 实验方法14-20
• 2.2.1 细胞培养及传代14-16
• 2.2.2 细胞冻存16-17
• 2.2.3 冻存细胞的复苏17
• 2.2.4 MTT法检测SM-164单药及联合盐酸多柔比星（ADM）对U2OS的增殖抑制影响17-18
• 2.2.5 Hoechst荧光染色试剂盒观察U2OS凋亡18
• 2.2.6 流式细胞仪(FCM)检测ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）联合SM-164（100n M）诱导U-2 细胞凋亡18-19
• 2.2.7 统计学方法19-20
• 第3章 实验结果20-27
• 3.1 不同浓度SM-164单药作用下U2OS生长曲线20-21
• 3.2 SM-164联合ADM对U2OS增殖的抑制实验结果21-22
• 3.3 hoechst试剂盒染色U-2 细胞凋亡检测结果22-24
• 3.4 流式细胞仪测ADM（0.25μg/m L、0.5μg/m L）联合SM-164（100n M）诱导U-2 细胞凋亡结果24-27
• 第4章 讨论27-30
• 4.1 SM-164联合盐酸多柔比星(ADM)对U-2 细胞增殖的影响27-28
• 4.2 SM-164联合盐酸多柔比星(ADM)对U-2 细胞凋亡的影响28
• 4.3 SM-164诱导U-2 细胞凋亡的相关作用机制28-29
• 4.4 本实验的不足之处29-30
• 第5章 结论与展望30-31
• 5.1 结论30
• 5.2 进一步工作方向30-31
• 致谢31-32
• 参考文献32-34
• 综述34-42
• 参考文献40-42

【参考文献】

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1 刘国雄;娄楠;王洋;吴元成;黄岚峰;;长春新碱对人成骨肉瘤MG63细胞的增殖抑制和凋亡促进作用及其机制[J];中国实验诊断学;2013年09期

2 龙海涛;李康华;朱勇;肖文峰;祝伟宏;;非甾体类抗炎药对骨肉瘤细胞株增殖和凋亡的影响[J];中国骨与关节杂志;2012年02期

3 牟钰钦;周龙洋;杨秋s，

本文编号：932369