S0X4在软骨肉瘤中的表达及其分子特征分析的研究

发布时间：2017-09-28 08:28

  本文关键词：S0X4在软骨肉瘤中的表达及其分子特征分析的研究

  更多相关文章： SOX4 miR-30a 软骨肉瘤 预后

【摘要】：[背景目的]软骨肉瘤是多相性的原发性恶性骨肿瘤之一,且具有强烈的放、化疗抵抗。目前,外科切除术仍是唯一有效治疗方法。但由于其发病部位无法切除以及由术后引起的复发转移等原因所导致的预后往往很差。在软骨肉瘤的多种类型中,其传统的软骨肉瘤是最常见的类型,且大部分是低级别的传统的软骨肉瘤。而低级别的软骨肉瘤通常具有进展为恶性的预后差的高级别的软骨肉瘤的能力。因此寻找新颖的预后因子和治疗靶点对软骨肉瘤的治疗十分迫切。SOX基因家族成员,因其特征性的含有HMG DNA结合域,参与着多种细胞发展过程,例如在软骨形成中的SOX5,SOX6和SOX9。2002年,Sekiya等人证实SOX4在软骨形成过程中的表达要早于SOX5、SOX6和SOX9。在此之前,Reppe等人也证明了SOX4主要表达在胚胎生长板的矿化软骨区。综上这些研究,暗示了SOX4在软骨形成过程中具有重要的作用。除了作为转录因子外,SOX4也在多种癌症中过表达并促进其癌症进展,例如肝癌、肺癌、膀胱癌、前列腺癌等。此外,全基因组启动子分析表明SOX4与一些转录因子具有共合作的作用,其中包括与软骨肉瘤形成基因有关的c-MYC.E2F1和E2F4,暗示着SOX4与软骨肉瘤的进展具有潜在的关系。然而,到目前为止,有关SOX4在人类软骨肉瘤的表达及活性的检测,中外却没有报道。MicroRNAs是一群非编码的、单链的、约有22个核苷酸的小RNA分子。他们通过与特定的基因的mRNAs的3'UTR端序列互补来发挥转录抑制作用。在多种癌症形成过程中,miRNA的异常调节起到原癌基因或者抑癌基因的作用,当然在软骨肉瘤中亦是如此。尽管是初步研究,miR-30a已证明在子宫内膜癌、肝癌和慢性粒细胞性白血病等多种癌症发展过程中具有重要作用。然而有关miR-30a对软骨肉瘤的进展却未知。值得注意的是,miR-129、miR-335和miR-93等多种miRNAs的调控为SOX4在癌症中的过表达机制研究提供了新的视野。而关于SOX4在软骨肉瘤中表达机制仍不明确。综上,本论文将从以下三个部分进行研究：1.SOX4在软骨肉瘤中的表达、临床病理学特征及其预后意义；2.SOX4在软骨肉瘤中的分子特征：3.SOX4在软骨肉瘤中过表达机制的研究。[材料方法]将107例软骨肉瘤病例和59例软骨瘤病例的石蜡组织标本制作成两个组织芯片,并用免疫组化的方法来查看SOX4、c-MYC、P53和Ki67蛋白的表达情况。实时定量PCR和免疫蛋白印记(western blotting)来检测转录mRNA和蛋白的水平。细胞的功能通过转染、增殖(MTS)、侵袭(Transwell)和迁移(细胞划痕)等实验来完成检测。荧光素酶报告用于检验SOX4的3’UTR与miR-30a有结合位点。[结果分析]SOX4在软骨肉瘤中的表达明显高于在软骨瘤的表达(P=0.003).且其过表达与组织分级(P0.001)、伴随复发(P=0.041)具有显著关联。此外,我们还证明了SOX4的过表达与c-MYC(P=0.011)和P53(P=0.029)的阳性表达及Ki67(P0.001)高表达密切相关。更有趣地是,SOX4在低级别的软骨肉瘤病人中是独立的不良预后因子。功能上,在软骨肉瘤细胞株SW1353中验证得知,SOX4干扰后会明显降低其细胞的增殖、迁移和浸润的能力,暗示着SOX4在软骨肉瘤细胞株中具有原癌基因的作用。伴随着miRNA机制的不断深入研究,我们首次在软骨肉瘤细胞株中证明了SOX4受miR-30a的直接调控,且miR-30a在SW1353中是一种肿瘤抑制剂。与此同时,在软骨肉瘤组织中也证明了SOX4的表达受miR-30a的负性相关调控。[实验结论]我们首次发现了SOX4在软骨肉瘤的致瘤作用,而且我们还首次证明了在软骨肉瘤细胞株SW1353中SOX4受miR-30a的调控。更有趣地是,SOX4的过表达可作为低级别的软骨肉瘤的预后因子。
【关键词】：SOX4 miR-30a 软骨肉瘤 预后
【学位授予单位】：山东大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R738.3
【目录】：

• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-11
• 符号说明11-13
• 前言13-15
• 第一部分 SOX4在软骨肉瘤中的表达、临床病理学特征及其预后意义15-22
• 材料方法15-18
• 结果分析18-21
• 实验小结21-22
• 第二部分 S0X4在软骨肉瘤细胞中的分子特征22-36
• 材料方法22-34
• 结果分析34-35
• 实验小结35-36
• 第三部分 SOX4在软骨肉瘤中过表达机制研究36-44
• 材料方法36-41
• 结果分析41-43
• 实验小结43-44
• 讨论44-46
• 结论46-47
• 附图表47-55
• 参考文献55-60
• 致谢60-61
• 攻读硕士学位期间发表的论文目录61-62
• 附录62-72
• 附件72

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本文编号：934817