去甲基化药物地西他滨增强细胞毒药物抗髓系白血病的机制研究

发布时间：2017-09-29 15:18

  本文关键词：去甲基化药物地西他滨增强细胞毒药物抗髓系白血病的机制研究

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【摘要】：研究背景及目的:急性髓系白血病(acute myeloid leukemia,AML)是一类起源于造血干细胞遗传及表观遗传学改变的骨髓细胞异常克隆增殖性疾病,造成骨髓细胞的增殖、分化及自我更新过程紊乱,原始细胞比例增高,破坏正常造血功能。表观遗传学影响染色质结构,并调节基因表达和保证遗传信息,这对健康细胞、组织和器官中的关键调控基因的正常表达十分重要。表观遗传发生变异将导致基因表达的变化,以DNA甲基化最为常见。目前AML的标准治疗方案仍为蒽环类药物联合阿糖胞苷(Cytarabine,Ara-C)。已发现在AML中DNA甲基转移酶1(DNA methyltransferase1,DNMT 1)表达上调,去甲基化药物5-氮杂2’-脱氧胞苷,即地西他滨(Decitabine,DAC)是一种去甲基化剂,具有双重作用机制:低浓度时使沉默失活的抑癌基因激活并促进细胞分化,高浓度时通过抑制DNA合成发挥细胞毒作用。所以DAC在髓系细胞肿瘤中的作用受到广泛关注,尤其是DAC联合其他化疗方案(HA、HAG等)诱导治疗复发、难治性及老年髓系白血病,在临床上受到重视并获得较理想的缓解率。本研究旨在比较去甲氧柔红霉素(Idarubicin,IDA)或高三尖杉酯碱(Homoharringtonine,HHT)联合Ara-C 2种化疗方案对初治AML(除外急性早幼粒细胞,acute promyelocytic leukemia,APL)的疗效及不良反应,并探讨DAC增强细胞毒药物HHT抗髓系白血病的机制。方法:(1)收集自2012年01年01日至2015年06年30日至本中心就诊,并采用减低剂量的IDA或HHT联合Ara-C治疗的初治AML(APL除外)患者,分析疗效其及不良反应;(2)采用MTT比色法研究去甲基化药物DAC、细胞毒药物HHT单药或两药序贯联合处理后对髓系HL-60细胞株增殖的影响;(3)采用流式细胞术检测药物作用后胞浆β-环联蛋白(β-catenin)的表达及对细胞周期的变化影响;(4)采用Western blot检测药物处理HL-60细胞后β-catenin在细胞浆、细胞核中的表达水平;(5)采用细胞免疫荧光技术检测药物作用后β-catenin在胞浆、胞核的定位变化;(6)采用q RT-PCR检测药物对HL-60细胞中Wnt通路相关基因m RNA表达的影响。结果:(1)诱导治疗2疗程后,低剂量IA方案组67例患者中46例达完全缓解(complete remission,CR),CR率为68.7%,低剂量HA方案组20例患者中8例达CR,CR率为40%,两组差异有统计学意义(P=0.02)。两组患者总有效率(overall response rate,ORR)分别为77.6%和60%,两组差异无统计学意义(P0.05)。两组方案的不良反应主要包括血液学和非血液学两方面,其中血液学方面主要为骨髓抑制,除中性粒细胞持续1×109/L的中位时间差异具统计学意义(P=0.003)外,余均无统计学意义(P0.05);而两组非血液学不良反应差异无统计学意义(P0.05);(2)DAC、HHT抑制HL-60细胞的增殖;(3)DAC阻止β-catenin由胞浆进入胞核,联合HHT后,胞浆、胞核中的β-catenin表达量均明显减少;(4)DAC、HHT使HL-60细胞阻滞于S期;(5)DAC下调Wnt通路相关基因的转录及表达,联合HHT后作用增强。结论:(1)对于初治AML(APL除外)患者,低剂量IA方案优于低剂量HA方案,差异具统计学意义(P0.05),但其不良反应程度较高;(2)DAC可能通过抑制Wnt通路活性增强HHT的细胞毒作用。
【关键词】：急性髓系白血病 去甲氧柔红霉素 高三尖杉酯碱 阿糖胞苷 HL-60细胞 地西他滨 β-catenin
【学位授予单位】：第四军医大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 缩略语表4-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-12
• 前言12-13
• 文献回顾13-22
• 1. 急性髓系白血病13-15
• 2. AML与表观遗传学15-16
• 3. 去甲基化药物治疗AML16-19
• 4. 经典Wnt通路19-22
• 第一部分 减低剂量的去甲氧柔红霉素或高三尖杉酯碱联合阿糖胞苷对初治急性髓系白血病的疗效观察22-29
• 引言22
• 1 资料与方法22-25
• 2 结果25-27
• 3 讨论27-29
• 第二部分 去甲基化药物地西他滨增强细胞毒药物抗髓系白血病的机制研究29-48
• 引言29-30
• 1. 主要材料30-33
• 2. 实验方法33-40
• 3. 实验结果40-45
• 4. 讨论45-48
• 小结48-49
• 参考文献49-56
• 个人简历和研究成果56-57
• 致谢57

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本文编号：942737