基于Aurora-A抑制调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖与血管新生的实验研究

发布时间：2017-09-30 01:07

  本文关键词：基于Aurora-A抑制调控人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖与血管新生的实验研究

  更多相关文章： 乳腺癌 Aurora-A SiRNA 血管新生

【摘要】：目的：验证抑制Aurora-A表达后能否抑制人乳腺癌MDA-MB-231细胞体外增殖与促血管新生的能力,并初步探讨相关作用机制。方法：以人乳腺癌MDA-MB-231细胞作为实验对象,将特异siRNA转染入细胞来抑制Aurora-A的表达。以转染对照siRNA的细胞为对照组,用Western Blot法验证低表达Aurora-A的实验组建立是否成功。以正常MDA-MB-231细胞作为对照组,应用CCK-8法检测细胞增殖抑制率,Transwell侵袭实验检测细胞侵袭能力,人脐静脉内皮细胞小管生成实验检测促血管管腔形成能力,Elisa法检测分泌至细胞外的VEGF蛋白水平,q-PCR检测细胞内VEGFmRNA表达水平。结果以均数±标准差表示,以SPSS20软件进行统计分析,采用独立样本t检验,P0.05时认为差异有统计学意义。结果：1、使用特异的siRNA转染乳腺癌MDA-MB-231细胞,WB的灰度分析结果显示,相较于正常MDA-MB-231细胞组,转染特异Aurora-A siRNA的细胞中Aurora-A及p-Aurora-A的蛋白表达水平分别被下调32%、72%,差异有统计学意义(p值均0.05)。2、以正常MDA-MB-231细胞为对照组,沉默Aurora-A后24h对MDA-MB-231细胞的增殖抑制率为17.9±2.7%。Transwell实验显示沉默Aurora-A后突破基质胶进入Transwell下室的细胞数量为85.8±10.6,明显少于对照组的细胞数量119.2±10.9,减少28.0±14.1%,差异有统计学意义(p0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231细胞体外增殖、侵袭的能力减弱。3、以正常MDA-MB-231细胞为对照组,HUVEC小管生成实验显示沉默Aurora-A后形成的管腔形态不完整,HUVEC细胞排列不规则。管腔数目计数结果显示沉默Aurora-A后形成的管腔数目为6.4±1.3,明显少于对照组的15.2±1.3,差异有统计学意义(p0.05)。表明沉默Aurora-A能使MDA-MB-231细胞的促血管生成能力减弱。4、用q-PCR检测两组细胞VEGF的mRNA表达发现,沉默Aurora-A后,VEGF mRNA的表达量明显下降,为对照组的14.3±0.9%,差异具有统计学意义(P0.001)。用Elisa法检测两组细胞分泌至胞外VEGF的蛋白量,结果显示对照组细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为911.1±7. Opg/ml,沉默Aurora-A组细胞培养上清中VEGF蛋白浓度为555.9±18.4 pg/ml,下降至对照组的61.0%,差异有统计学意义(P0.001)。表明沉默Aurora-A后MDA-MB-231细胞的VEGF转录及蛋白分泌均受到明显抑制。结论：1、成功利用Aurora-A siRNA转染MDA-MB-231细胞,使Aurora-A蛋白表达量下降。2、抑制Aurora-A的表达后,能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞增殖、侵袭。3、抑制Aurora-A的表达后,能有效抑制乳腺癌MDA-MB-231细胞促血管新生的功能,其机制可能为直接或间接抑制VEGF的mRNA转录与蛋白分泌,从而抑制VEGF/VEGFR信号通路。抑制Aurora-A有潜力成为有效治疗乳腺癌的靶点,值得今后进一步深入研究。
【关键词】：乳腺癌 Aurora-A SiRNA 血管新生
【学位授予单位】：东南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 中文摘要5-7
• 英文摘要7-10
• 中英文缩略词表10-12
• 前言12-17
• 文献综述17-22
• 第一部分 材料与方法22-35
• 第二部分 实验结果35-41
• 第三部分 讨论41-44
• 结论44-45
• 致谢45-46
• 参考文献46-52
• 作者简介52

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前7条

1 陈万青;郑荣寿;曾红梅;邹小农;张思维;赫捷;;2011年中国恶性肿瘤发病和死亡分析[J];中国肿瘤;2015年01期

2 陈晓庆;丛丽;;脂肪因子与乳腺癌关系研究进展[J];肿瘤研究与临床;2013年03期

3 陈聪琴;范艳华;吕文文;赵庆春;;抗肿瘤新靶点——极光激酶及其小分子抑制剂研究进展[J];国际药学研究杂志;2013年01期

4 张军;周晓红;;肿瘤治疗靶向药物Aurora激酶抑制剂[J];天津药学;2012年01期

5 田富国;罗飞;赵浩亮;;Aurora激酶A在三阴性乳腺癌中的表达及与临床病理特征的相关性[J];中国药物与临床;2011年S1期

6 钟亚莉;童彤;詹启敏;杨观瑞;唐芙爱;;Aurora A在食管鳞癌组织中的表达及意义[J];肿瘤基础与临床;2009年02期

7 李国权,宫琳琳,邹丽娟,邵淑娟;Aurora-A激酶与恶性肿瘤研究进展[J];国外医学(肿瘤学分册);2004年02期

，

本文编号：945244