钙蛋白酶Capn1促进肝内胆管细胞癌转移复发的实验研究

发布时间：2017-09-30 07:38

  本文关键词：钙蛋白酶Capn1促进肝内胆管细胞癌转移复发的实验研究

  更多相关文章： 钙蛋白酶 Capn1 肝内胆管细胞癌 预后 上皮间质转化

【摘要】：肝内胆管细胞癌(Intrahepatic Cholangiocarcinoma, ICC)是一种具有胆管上皮特性的的肝内原发性恶性肿瘤,肝内胆管细胞癌作为发病率第二的原发性肝癌(Primary liver cancer, PLC),约占10-15%,仅次于肝细胞性肝癌。近二十年来肝内胆管细胞癌发病率在世界范围内有明显升高,特别是东南亚地区。目前手术切除仍是肝内胆管细胞癌首选且最有效的治疗方法,但是,即使能够手术切除肿瘤的患者,由于术后早期复发、肿瘤生长迅速及远处转移等原因,预后也很差,患者3年和5年生存率只有30%和18%。因此,探悉肝内胆管细胞癌复发及转移过程中的分子机制,筛查新的关键分子,对提高肝内胆管细胞癌患者的预后判断准确性及开发新的治疗靶点有着重要的临床现实意义。钙蛋白酶(Capn)是一类有着相似催化结构域的性质保守的半胱氨酸蛋白酶,催化众多特殊的基质调控蛋白水解。钙蛋白酶参与体内一系列细胞基本生理过程,包括细胞骨架重建,胞内信号转导,细胞的增殖及凋亡等。已知钙蛋白酶系统在超过12种哺乳动物体内存在。相关研究证实钙蛋白酶在乳腺癌,子宫内膜癌和胰腺癌等一系列肿瘤的发生发展过程起着重要的调控作用。钙蛋白酶家族包含十余种亚基,Capn1和Capn2的组织表达最为广泛,因而最受关注。Capn1和Capn2根据体外激活所需的钙离子浓度命名,和调节亚基Capn4 (28kDa)结合成异构二聚体形式发挥其生理功能,其中Capn1只需要微摩尔级的钙离子浓度就可以被激活而发挥作用。近期研究表明,钙蛋白酶表达与肿瘤的发生发展过程密切相关,研究发现神经鞘瘤、脑膜瘤和肾细胞癌肿瘤组织中Capn1表达均明显升高,同时,在子宫内膜癌组织中检测到钙蛋白酶抑制蛋白表达降低。到目前为止,Capn1在肝内胆管细胞癌发生发展过程中的表达改变及其作用未见报道。本研究通过检测140肝内胆管细胞癌患者癌组织和对应正常肝脏组织中Capn1、E-cadherin及Snail的表达,并且利用组织芯片技术分析验证了Cap n1表达异常与患者临床病理参数及预后间的相关性,探讨Capn1是否为肝内胆管癌患者的预后的预测指标。通过SiRNA干扰技术下调肝内胆管肿瘤细胞系中Capn1的表达,观察肝内胆管癌细胞的侵袭转移潜能的改变,阐明其对肝内胆管癌细胞的生物学特性的影响,进而,通过研究Capn1对上皮间质转化相关蛋白E-cadherin和Snai1表达的影响,对Capn1调控肝内胆管癌的侵袭转移机制进行了初步的探讨。第一部分Capn1及EMT指标在肝内胆管细胞癌中的表达及其相关性的研究目的：研究Capn1及E-cadherin、Snail在肝内胆管细胞癌组织和对应的癌旁肝脏组织中的表达情况,探讨Capn1与EMT标志物细胞黏附分子上皮型钙粘蛋白(E-cadherin)和间质相关蛋白S nail在肝内胆管细胞癌中的表达及其相关性。方法：应用免疫组化方法检测140例肝内胆管细胞癌患者病理组织中Capn1、Snail和E-cadhrein的表达：应用western blot方法检测四组肝内胆管细胞癌组织Capn1的表达：应用SPSS16.0进行统计学分析。结果：western bolt及免疫组化学结果均显示在肝内胆管细胞癌组织中,Capn1表达高于癌旁组织,两者间差异有统计学意义(p0.05)；早期复发病人Capn1表达较未复发组患者明显升高,差异有统计学意义(p0.05);免疫组化结果显示Snai1在癌组织中的表达明显高于癌旁组织,而E-cadheri n在癌组织中的表达低于癌旁组织。结论：Capn1、Snail在肝内胆管细胞癌组织中表达上调,而E-cadherin在肝内胆管细胞肿瘤中表达下调；Capn1与Snail、E-cadherin之间具有显著相关性(p0.05)；早期复发患者肿瘤组织中Capn1表达升高。第二部分Capn1与肝内胆管细胞癌临床病理特征的关系及其与EMT诊断预后的价值目的：通过免疫组化方法检测Capn1、E-cadherin及Snail在肝内胆管细胞癌组织中的表达,探讨Capnl与肝内胆管细胞癌临床病理特征的关系及其与E-cadherin Snail的预后意义。方法：应用免疫组化方法检测140例肝内胆管细胞癌病理组织中Capn1、E-cadherin及Snail的表达,探索Capn1与临床病理特征的关系及其与E-cadherin、Snail预后诊断价值。结果：Capn1高表达与肝内胆管细胞癌患者的血清CA19-9表达及肿瘤数目相关(p0.05)。Capn1、Snail高表达组术后总体生存率明显低于Capnl低表达组(p0.05),累计复发率明显高于Capn1低表达组(p0.05)；E-cadherin高表达组术后总体生存率高于Capnl低表达组而复发率低于Capn1低表达组。单因素及多因素分析显示Capn1、E-cadherin及Snail 表达是患者总体生存率和累计复发率的独立预后因子。结论：Capn1在肝内胆管细胞癌组织及早期复发患者的肿瘤组织表达中升高,与肝内胆管细胞癌的CA19-91表达及肿瘤TNM分期相关(p0.05)。肿瘤组织Capnl、Snail高表达及E-cadherin低表达患者其总体生存率更低,且术后早期复发几率更高。Capn1、E-cadherin及Snail在肿瘤组织中的表达差异具有预后诊断价值。第三部分Capn1表达对肝内胆管细胞癌细胞侵袭转移潜能的影响及其分子机制目的：探讨Capn1表达改变与肝内胆管癌细胞侵袭转移潜能的关系,并探索Capnl调控肝内胆管癌上皮间质转化的机制。方法：应用RNA干扰下调Capn1在肝内胆管细胞癌细胞株中的表达,并且验证干扰效率。应用划痕试验检测细胞迁移能力变化,transwell试验检测细胞侵袭能力变化,MTT试验检测细胞增殖能力的变化。利用western blot技术进一步探究Capn1表达调控肝内胆管癌上皮间质转化关键分子改变。结果：RNA干扰下调肝内胆管癌细胞株QBC939口RBE中Capn1表达,发现干扰组细胞迁移与侵袭能力、增殖能力较对照组明显减弱(p0.05),Capn1的表达改变与间质相关蛋白Snai1呈正相关而与上皮相关蛋白E-cadherin呈负相关。结论：Capn1高表达与肝内胆管癌细胞的侵袭迁移、增殖能力正相关,并且Capn1的表达改变及Snai1表达呈正相关,与E-cadherin表达呈负相关。
【关键词】：钙蛋白酶 Capn1 肝内胆管细胞癌 预后 上皮间质转化
【学位授予单位】：扬州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.8
【目录】：

• 中文摘要2-5
• 英文摘要5-9
• 英文缩略语9-10
• 前言10-11
• 第一部分 Capn1及EMT指标在肝内胆管细胞癌中的表达及其相关性的研究11-24
• 材料方法11-17
• 结果17-20
• 讨论20-22
• 参考文献22-24
• 第二部分 Capn1与肝内胆管细胞癌临床病理特征的关系及其与EMT诊断预后的价值24-33
• 材料方法24-26
• 结果26-30
• 讨论30-31
• 参考文献31-33
• 第三部分 Capn1表达改变对肝内胆管细胞癌细胞侵袭转移潜能的影响及其分子机制33-44
• 材料方法33-39
• 结果39-42
• 讨论42-43
• 参考文献43-44
• 文献综述44-52
• 参考文献47-52
• 致谢52-53
• 攻读学位期间发表的学术论文目录53-54

【相似文献】

中国期刊全文数据库 前10条

1 傅晓辉,汤朝晖,宗明,杨广顺,姚晓平,吴孟超;肝内胆管细胞癌的影像学特点分析[J];肝胆胰外科杂志;2005年01期

2 梁富坚;;肝内胆管细胞癌的螺旋CT三期增强特征及其诊断价值[J];医药产业资讯;2006年15期

3 王晓明;胡士杰;吴健雄;荣维淇;王黎明;;41例肝内胆管细胞癌的临床特点及其预后观察[J];中国肿瘤临床;2006年15期

4 杨忠诚;刘金贵;胡达;;肝内胆管细胞癌的影像学表现[J];湘南学院学报;2006年03期

5 胡士杰;吴健雄;荣维淇;王黎明;邵永孚;;28例肝内胆管细胞癌手术治疗分析[J];中国肿瘤临床与康复;2006年05期

6 郭勇;林革;罗旺启;吴茂铸;;肝内胆管细胞癌的多排螺旋CT诊断[J];现代中西医结合杂志;2007年09期

7 胡士杰;吴健雄;荣维淇;王黎明;邵永孚;;37例肝内胆管细胞癌手术治疗分析[J];肝胆外科杂志;2007年04期

8 庄礼钊;张敏杰;倪勇;程书榜;;肝内胆管细胞癌的诊断与治疗[J];实用临床医学;2007年07期

9 闫剑锋;冯国活;彭永军;;肝内胆管细胞癌的螺旋CT表现[J];影像诊断与介入放射学;2007年04期

10 成建萍;;彩色多普勒超声对21例肝内胆管细胞癌的诊断分析[J];苏州大学学报(医学版);2008年03期

中国重要会议论文全文数据库 前10条

1 李超伦;王文平;丁红;毛枫;黄备建;;肝内胆管细胞癌的实时灰阶谐波超声造影表现[A];中华医学会第十次全国超声医学学术会议论文汇编[C];2009年

2 ;肝内胆管细胞癌[A];中国抗癌协会胆道肿瘤专业委员会成立大会暨第一届全国胆道肿瘤学术会议论文集[C];2009年

3 胡晓燕;吴湖炳;王全师;;~(18)F-FDG PET/CT显像用于肝细胞癌与肝内胆管细胞癌的鉴别诊断[A];中华医学会第九次全国核医学学术会议论文摘要汇编[C];2011年

4 姜威;曾昭冲;汤钊猷;樊嘉;周俭;曾蒙苏;张建英;陈一兴;谭云山;;90例伴同步淋巴结转移的肝内胆管细胞癌术后放疗疗效分析[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年

5 陈一兴;曾昭冲;汤钊猷;樊嘉;周俭;姜威;陈兵;曾蒙苏;王建华;;129例不可切除肝内胆管细胞癌放疗疗效分析[A];中华医学会放射肿瘤治疗学分会六届二次暨中国抗癌协会肿瘤放疗专业委员会二届二次学术会议论文集[C];2009年

6 缪丁丁;高金亭;程新生;王甫誉;郑永彬;索质君;;肝内胆管细胞癌的诊断和治疗(附12例报告)[A];第十二届全国肝癌学术会议论文汇编[C];2009年

7 成建萍;;彩色多普勒超声对肝内胆管细胞癌的诊断[A];中国超声医学工程学会第七届全国腹部超声学术会议学术论文汇编[C];2007年

8 张法标;方哲平;王爱东;杜学峰;季一鸣;;肝内胆管细胞癌临床病理特点及影响预后分析[A];2012年浙江省外科学学术年会论文集[C];2012年

9 李超伦;王文平;丁红;毛枫;黄备建;;肝内胆管细胞癌的实时灰阶谐波超声造影表现[A];第二届长三角超声医学论坛暨2009年浙江省超声医学学术年会论文汇编[C];2009年

10 赵齐羽;蒋天安;陈芬;王利英;李琚;邓壮;;肝内胆管细胞癌超声造影增强模式分析[A];2011年浙江省超声医学学术年会论文汇编[C];2011年

中国重要报纸全文数据库 前1条

1 衣晓峰 金鸥 刘宇;哈医大四院新术式治疗肝内胆管细胞癌合并瘤内出血[N];中国医药报;2014年

中国博士学位论文全文数据库 前5条

1 刘衡;YB-1与肝内胆管细胞癌增殖和多药耐受性关系的研究[D];上海交通大学;2014年

2 周华邦;肝内胆管细胞癌危险因素及其发病机制研究[D];第二军医大学;2010年

3 原泉;团块型肝内胆管细胞癌的预后因素研究[D];第二军医大学;2014年

4 史若愚;分泌型蛋白DKK1在肝内胆管细胞癌侵袭转移中的作用及其机制研究[D];复旦大学;2012年

5 顾方明;IL-17对原发性肝癌生物学特性的影响及临床意义研究[D];复旦大学;2011年

中国硕士学位论文全文数据库 前10条

1 胡晓燕;~(18)F-FDG PET/CT显像对肝细胞癌与肝内胆管细胞癌诊断的比较研究[D];南方医科大学;2011年

2 赵贤慧;肝内胆管细胞癌的预后影响因素分析[D];广西医科大学;2016年

3 吴超;钙蛋白酶Capn1促进肝内胆管细胞癌转移复发的实验研究[D];扬州大学;2016年

4 谢楠;B7-H4的异常表达在肝内胆管癌发病机制中的作用研究[D];昆明医科大学;2016年

5 毕爱红;肝内胆管细胞癌微侵袭灶的病理及相关临床因素分析及其用于临床靶区确定的意义[D];复旦大学;2009年

6 毛枫;肝内胆管细胞癌的超声综合诊断评价[D];复旦大学;2008年

7 魏伟;肝内胆管细胞癌诊疗分析（附53例报告）[D];福建医科大学;2010年

8 周福平;运用激光捕获显微切割对肝细胞癌和肝内胆管细胞癌蛋白质组的研究[D];第二军医大学;2005年

9 胡士杰;影响肝内胆管细胞癌预后因素的临床研究[D];中国协和医科大学;2006年

10 周少君;肝内胆管细胞癌手术预后因素的分析[D];华中科技大学;2012年

，

本文编号：946947