多基因甲基化水平调控的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性探究

发布时间：2017-09-30 11:22

  本文关键词：多基因甲基化水平调控的乳腺癌MCF-7对他莫昔芬敏感性探究

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【摘要】：目的寻找ER/PR(+)乳腺癌MCF-7耐他莫昔芬(TAM)细胞株相关的抑癌基因Cp G岛启动子甲基化异常状态,筛选出能够预测MCF-7对他莫昔芬敏感性相关的关键基因,为抑癌基因启动子区域异常甲基化作为预测临床内分泌治疗敏感性方法提供理论依据。方法1.用噻唑蓝比色法(MTT)法对比检测MCF-7/TAM耐药倍数及乳腺癌MCF-7细胞株与耐药株MCF-7/TAM生长增殖差异。2.流式细胞术(FCM)对比两细胞株生长周期及凋亡率之间差异。3.RT-PCR和real-time PCR检测亲本与耐药细胞株MCF-7/TAM相关基因(DAPK、RASSF1A、MGMT、P53、DNMT1、DNM3B、DNMT3A)的m RNA表达差异。4.MS-PCR检验候选基因(DAPK、MGMT、P53、RASSF1A)在MCF-7及MCF-7/TAM中的启动子甲基化水平。结果1.MTT显示:48h MCF/TAM的IC50值为(17.92±0.03)μmol/L,耐药倍数为2.63(t=51.20,P0.05)MCF/TAM细胞株增殖水平较高(t=4.472,P0.001)。2.流式分析:MCF-7较MCF-7/TAM细胞株Gl期的部分阻滞,生长抑制,凋亡率较高。3.real-time PCR显示:MCF-7/TAM细胞株中基因DAPK(Z=-2.087,P0.05)、RASSF1A(Z=-4.123,P0.001)m RNA表达水平低于亲本MCF-7细胞株;而基因P53(Z=10.378,P0.001)、MGMT(Z=42.378,P0.001)、DNMT1(Z=19.378,P0.001)、DNM3B(Z=9.378,P0.001)的mRNA表达水平高于MCF-7细胞株;基因DNMT3A的mRNA表达水平过低,在耐药株与亲本细胞株中均未能检出。4..MSP显示,在MCF-7/TAM细胞株中,基因DAPK、P53、RASSF1A启动子为甲基化状态;而亲本细胞株中基因DAPK、P53、RASSF1A启动子为非甲基化状态;MCF-7/TAM细胞株中MGMT去甲基化水平增高,结合real-time PCR各基因m RNA表达水平检测,可见,各基因表达水平与其启动子甲基化状态呈负相关性,基因P53表达水平与甲基化状态不一致,可能还受其他因素调控。结论1.乳腺癌MCF-7/TAM细胞株存在多种基因启动子甲基化现象。2.在乳腺癌MCF-7/TAM细胞株中,基因MGMT去甲基化水平降低,表达水平显著升高,可作为预测内分泌治疗耐受性的敏感基因。3.在乳腺癌MCF-7/TAM细胞株中,基因DNMT1、DNMT3B表达量明显升高,将为运用表观遗传学逆转药物耐受性研究提供新的思路。
【关键词】：MCF-7 DNA甲基化 内分泌耐药 抑癌基因
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 摘要6-8
• ABSTRACT8-10
• 1 前言10-13
• 2 实验材料与方法13-34
• 第一部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 细胞株的培养13-17
• 第二部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 细胞株生长增殖、凋亡检测17-21
• 第三部分 MCF-7 和 MCF-7/TAM 细胞株抑癌基因表达差异检测21-27
• 第四部分 MSP 法检测两细胞株相关基因的甲基化状态27-33
• 统计处理33-34
• 3 结果34-41
• 4 讨论41-44
• 5 结论44-45
• 6 展望45-46
• 参考文献46-49
• 附录49-51
• 致谢51-52
• 综述52-59
• 参考文献56-59

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 张燕青;王连生;;基因多态对他莫昔芬疗效影响研究进展[J];中国药理学与毒理学杂志;2012年03期

2 蔡樝;孙晋枫;黄朝晖;余坚;何英华;戴信兰;周小羽;徐慧莉;顾峻;张红宇;胡夕春;朱景德;;ABCC8、CHFR、BMP3B、LOX、PRSS21和RASSF1A基因启动子的甲基化状态可能与3种乳腺癌细胞株对5-FU的敏感性相关[J];肿瘤;2009年01期

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本文编号：947932