miR-153和miR-520b对肿瘤细胞自噬的调控机制研究

发布时间：2017-10-01 01:05

  本文关键词：miR-153和miR-520b对肿瘤细胞自噬的调控机制研究

  更多相关文章： 自噬 miR-153 miR-520b 食管鳞癌 乳腺癌

【摘要】：自噬,又称Ⅱ型程序性细胞死亡,是细胞正常的生命活动之一,细胞在正常状态下会保持较低的自噬水平,以此来作为一种细胞生存生长的保护机制,但是当细胞受到来自内外某种特定刺激时,将发生异常自噬,microRNA作为一种非编码RNA，，通过特异性结合靶基因的3’-UTR区域,抑制靶基因mRNA水平和翻译。然而,至今仍有大量自噬相关microRNA有待发掘。本课题发现了两种microRNA可以通过特异调控靶基因表达,影响肿瘤细胞自噬水平,进而影响细胞增殖、迁移、侵袭等生物学表型。采用筛选加验证的方法,前期工作首先是通过实验筛选出两种理想的细胞模型,即确定研究的肿瘤细胞系,接着探索这两种细胞模型发生自噬的最佳诱导条件；筛选环节是将所有未发表过的microRNA进行筛选,在初步筛选出研究目标后,工作重点就是对筛选结果进行全方面多层面的验证。此外,还通过生物信息学的方法,对目标microRNA的靶基因进行预测,并采用实时定量PCR以及Western blot方法对预测结果进行验证,从而完善了该调控机制。本研究首次发现,miR-153和miR-520b均可显著促进食管癌KYSE450细胞和乳腺癌MCF-7细胞自噬；其中miR-520b是与癌基因CDCA7靶向结合使其沉默,且生物信息学提示,CDCA7与自噬相关基因CASP2互为ceRNA,CASP2可以通过竞争性结合miR-520b来调节CDCA7的表达。文献报道,自噬相关基因CASP2的消耗会引起细胞自噬水平升高;故高表达miR-520b可以促进细胞自噬。与此同时,体外细胞功能实验结果表明,miR-153和miR-520b可以显著抑制肿瘤细胞的增殖、迁移和侵袭。总而言之,这些结果表明miR-153和miR-520b是一种肿瘤生物治疗的潜在靶分子。
【关键词】：自噬 miR-153 miR-520b 食管鳞癌 乳腺癌
【学位授予单位】：北京化工大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要5-7
• ABSTRACT7-16
• 第一章 绪论16-24
• 1.1 自噬概述16-19
• 1.1.1 自噬简介16-17
• 1.1.2 自噬的检测方法17-18
• 1.1.3 microRNA与肿瘤细胞自噬的关系18-19
• 1.2 microRNA简介19
• 1.3 生物信息学19-21
• 1.3.1 生物信息学简介19-20
• 1.3.2 常用的生物信息学软件20-21
• 1.4 立项背景与研究意义21
• 1.5 本论文的主要研究内容21-24
• 第二章 miR-153和miR-520b促进肿瘤细胞自噬研究24-56
• 2.1 实验材料24-29
• 2.1.1 实验试剂24-26
• 2.1.2 实验设备26-28
• 2.1.3 实验耗材28
• 2.1.4 相关溶液的配制28-29
• 2.1.5 实验对象29
• 2.2 实验方法29-38
• 2.2.1 细胞培养29
• 2.2.2 细胞转染29-30
• 2.2.3 蛋白样品的制备30-31
• 2.2.4 Western blot实验31-33
• 2.2.5 RNA样品的制备33-36
• 2.2.6 RT-qPCR实验36-38
• 2.2.7 激光共聚焦成像实验38
• 2.3 实验结果与讨论38-44
• 2.3.1 筛选研究对象38-39
• 2.3.2 蛋白质水平验证39-42
• 2.3.3 细胞水平验证42-44
• 2.4 miR-153和miR-520b靶基因的预测及实验验证44-51
• 2.4.1 对miR-520b靶基因的预测44-45
• 2.4.2 对miR-520b预测靶基因的实验验证45-49
• 2.4.3 对miR-153靶基因的预测49
• 2.4.4 对miR-153预测靶基因的实验验证49-51
• 2.5 注意事项51-53
• 2.5.1 细胞培养过程中的注意事项51-52
• 2.5.2 细胞中RNA提取过程中注意事项52
• 2.5.3 Western blot实验过程中的注意事项52-53
• 2.6 本章小结53-56
• 第三章 miR-153和520b在肿瘤中的细胞生物学功能研究56-68
• 3.1 实验材料56-58
• 3.1.1 实验试剂56
• 3.1.2 实验设备56-57
• 3.1.3 实验耗材57-58
• 3.1.4 相关溶液的配制58
• 3.1.5 实验对象58
• 3.2 实验方法及结果58-66
• 3.2.1 细胞增殖实验58-63
• 3.2.2 细胞划痕实验63-66
• 3.3 注意事项66
• 3.4 本章小结66-68
• 第四章 结论、创新点与展望68-70
• 4.1 本论文的结论68
• 4.2 本论文的创新点68-69
• 4.3 展望69-70
• 参考文献70-74
• 致谢74-76
• 研究成果及学术论文76-78
• 作者和导师简介78-79
• 硕士研究生学位论文答辩委员会决议书79-80

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本文编号：951418