LIMK1过表达对罗格列酮抑制胃癌裸鼠移植瘤的影响

发布时间：2017-10-01 02:32

  本文关键词：LIMK1过表达对罗格列酮抑制胃癌裸鼠移植瘤的影响

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【摘要】：目的:通过构建过表达LIMK1的MGC-803稳定细胞株,观察LIMK1与罗格列酮(Rosiglitazone,ROS)对胃癌细胞裸鼠移植瘤的影响。方法:构建慢病毒介导的含有过表达LIMK1的病毒载体系统并对MGC-803细胞进行感染,筛选稳定过表达LIMK1的细胞株。用q PCR及Western blot对稳定细胞株进行鉴定。收集好OE组、NC组和空白对照组三组细胞接种于裸鼠前肢腋下,观察裸鼠成瘤情况。待移植瘤体积长至100mm3时,在成瘤的三组细胞里随机各均分为两组,每组8只,共6组。实验组予以罗格列酮100mg/kg/2d灌胃处理,对照组予以生理盐水灌胃。每6天测量瘤体的长短径,并称重,以此绘制移植瘤生长曲线图。48天以后,把成瘤的裸鼠处死,检测每组移植瘤的大小、重量并计算抑瘤率。HE染色观察移植瘤形态学变化,免疫组织化学方法和Western blot检测ROS处理后裸鼠移植瘤LIMK1蛋白表达并进行统计学分析。结果:1.成功地构建了稳定过表达LIMK1的MGC-803细胞系。用慢病毒介导的过表达LIMK1的病毒载体去感染MGC-803细胞,检测到细胞的绿色荧光提示病毒成功感染了MGC803细胞,经嘌呤霉素对细胞进行筛选,可观察到细胞的绿色荧光稳定表达。q PCR及Western blot实验显示,过表达LIMK1的m RNA与蛋白表达水平较空载体组上调,差异有统计学意义(P0.05)。而转染空载体组的MGC803细胞与空白对照组相比,LIMK1的蛋白表达水平,差异无统计学意义(P0.05)。2.ROS对过表达LIMK1的MGC803细胞裸鼠移植瘤的影响。(1)对移植瘤生长的影响:IMK1过表达组移植瘤的体积及重量明显高于空白对照组和NC组,而ROS灌药组的体积及重量明显低于未灌药组。经计算灌药组均有一定的抑瘤率。(2)对移植瘤形态学的影响:未灌药组较ROS灌药组组的细胞异型性大,细胞间质多,细胞核染色深,核质比多,细胞排列紊乱,其中LIMK1过表达组最为明显。(3)对移植瘤蛋白表达的影响:各组移植瘤中均有LIMK1蛋白的表达(棕黄色颗粒,为胞质或胞膜),在40倍物镜下对比观察,以C组(LIMK1过表达)最为明显,未灌药组(A、B、C)较ROS灌药组(D、E、F)的LIMK1蛋白表达强。结论:1.LIMK1过表达可以促进MGC-803细胞裸鼠移植瘤的生长。2.罗格列酮可以抑制MGC-803细胞裸鼠移植瘤的的生长。3.LIMK1可能是罗格列酮抑制人胃癌MGC-803细胞增殖、迁移及侵袭的作用靶点。
【关键词】：罗格列酮 LIMK1过表达 MGC-803细胞 裸鼠 移植瘤
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 中文摘要4-6
• 英文摘要6-10
• 主要缩略语英文索引10-11
• 第1章 前言11-13
• 第2章 材料和方法13-23
• 第3章 实验结果23-37
• 第4章 讨论37-41
• 第5章 结论41-43
• 参考文献43-47
• 文献综述 LIMK1/Cofilin信号通路与肿瘤的研究进展47-55
• 参考文献52-55
• 攻读硕士期间发表的论文55-57
• 致谢57

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本文编号：951862