HBV通过调节miR-499a抑制靶基因CFLAR表达

发布时间：2017-10-01 18:01

  本文关键词：HBV通过调节miR-499a抑制靶基因CFLAR表达

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【摘要】：目的‘探讨miR-499a及靶基因在肝癌细胞中的关系。方法1.通过实时定量聚合酶链反应(Real-time PCR)检测miR-499a在HepG2与HepG2.2.15细胞中、表达HBV的腺病毒瞬时感染HepG2细胞(Ad-HBV-HepG2)与其对照组感染GFP的HepG2细胞(Ad-GFP-HepG2)中的表达。2.构建miR-499a的过表达质粒(pTARGET-miR-499a)并且运用Real-time PCR的方法验证过表达效果,通过miRNA靶基因预测软件如TargetScan和miRDB,筛选到miR-499a靶基因CFLAR,构建靶基因CFLAR的3'UTR(3'端Untranslated Regions)野生型和突变型荧光素酶报告质粒,运用荧光素酶报告系统检测靶基因CFLAR与miR-499a的相互作用。3.通过Real-time PCR在mRNA水平和Western-blot在蛋白质水平验证CFLAR是否为miR-499a的靶基因。购买miR-499a的抑制剂miR-499a inhibitor,通过Real-time PCR的方法验证干扰效果,再运用Real-time PCR和Western-blot实验进一步验证CFLAR是miR-499a的一个靶基因。4.通过qRT-PCR和Western Blot检测HBV对CFLAR表达的影响。结果1.miR-499a在HepG2.2.15细胞中的表达高于HepG2细胞,在Ad-HBV-HepG2细胞中的表达高于Ad-GFP-HepG2细胞。2. miR-499a通过结合CFLAR的3'UTR来抑制其表达。3.在SMMC7721细胞中过表达miR-499a, CFLAR在mRNA和蛋白水平表达降低。干扰miR-499a的表达,CFLAR在mRNA和蛋白水平表达升高。4.HBV抑制CFLAR的表达。结论在肝癌细胞中HBV能上调miR-499a的表达,CFLAR是miR-499a的靶基因之一,HBV可以通过上调m1R-499的表达抑制CFLAR的表达。
【关键词】：HBV miR-499a CFLAR
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7;R440
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 HBV上调肝癌细胞系中miR-499a的表达13-19
• 1 材料与方法13-17
• 2 结果17-18
• 3 讨论18-19
• 第二部分 CFLAR是miR-499a的一个靶基因19-36
• 1 材料与方法19-31
• 2 结果31-34
• 3 讨论34-35
• 参考文献35-36
• 第三部分 HBV调节CFLAR的表达36-38
• 1 材料和方法36
• 2 结果36-37
• 3 讨论37
• 参考文献37-38
• 全文总结38-39
• 参考文献39-40
• 文献综述：miRNAs在肝癌中的角色40-49
• 参考文献43-49
• 致谢49-50
• 攻读硕士学位期间发表的学术论文50

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1 张靖南;HBV通过调节miR-499a抑制靶基因CFLAR表达[D];重庆医科大学;2015年

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本文编号：954837