血小板型十二脂氧合酶抑制剂在胃癌细胞增殖与迁移中的作用研究

发布时间：2017-10-02 15:21

  本文关键词：血小板型十二脂氧合酶抑制剂在胃癌细胞增殖与迁移中的作用研究

  更多相关文章： 胃癌 p12-LOX Ezrin BAI EMT 迁移 TGF-β/Smad信号通路 MAPK/ERK信号通路

【摘要】：目的：探讨血小板型12-脂氧合酶(platelet type 12-lipoxygenase, p12-LOX)选择性抑制剂黄芩素(baicalein, BAI)对胃癌MKN-28细胞增殖和迁移的影响及其机制。方法：应用RT-PCR检测胃癌MKN-28细胞和正常胃黏膜GES-1细胞中p12-LOX的mRNA表达；不同浓度的BAI处理MKN-28细胞后,应用MTT法检测细胞的增殖情况;划痕愈合实验和Transwell小室迁移实验检测细胞迁移能力;Hoechst染色观察细胞凋亡；免疫荧光染色法检测E-cadherin和Snail蛋白的表达；Western blot实验检测p12-LOX和Ezrin蛋白、凋亡相关蛋白、EMT标志物蛋白及TGF-β/Smad和MAPK/ERK信号通路的相关蛋白表达的影响；流式细胞仪检测细胞周期及细胞凋亡的影响。结果：1.胃癌MKN-28细胞中p12-LOX和Ezrin基因表达水平明显高于正常胃粘膜GES-1细胞(P0.01); 2.MTT实验结果显示,BAI显著抑制MKN-28细胞的增殖,并呈时间和剂量依懒性(P0.05),但对GES-1细胞增殖能力的影响不明显；3.流式细胞仪检测结果显示,10μM BAI处理MKN-28细胞,可将细胞周期阻滞在G0/G1期,并诱导发生细胞凋亡(P0.05)；Hoechst33342染色及流式细胞仪检测结果显示,BAI可诱导MKN-28细胞凋亡(P0.01)；4.划痕愈合实验及Transwell室迁移实验结果显示,BAI处理可使MKN-28细胞的迁移能力明显下降(P0.05)；免疫荧光染色结果亦表明,BAI处理可上调MKN-28细胞的E-cadherin蛋白表达(P0.05),下调Snail蛋白表达(P0.01)；5. Western blot结果显示,BAI处理MKN-28细胞显著抑制p12-LOX. Ezrin, GSK-3β、 Vimentin、 Snail、 p-MEKK1, p-Erk1/2、 TGF-β1和p-Smad3蛋白表达水平(P0.01)；上调Cleaved-Caspases-3和E-cadherin表达水平(P0.05或P0.01)。结论：1.胃癌MKN-28细胞中p12-LOX和Ezrin基因的呈高表达；2.p12-LOX抑制剂BAI可有效抑制MKN-28细胞的增殖、迁移和EMT的发生,并诱导胞凋亡；3.MAPK/ERK及TGF-β/Smad信号通路可能参与了BAI抗胃癌MKN-28细胞增殖和迁移的分子机制。
【关键词】：胃癌 p12-LOX Ezrin BAI EMT 迁移 TGF-β/Smad信号通路 MAPK/ERK信号通路
【学位授予单位】：延边大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-9
• 缩略词9-11
• 第一章 前言11-16
• 第二章 材料与方法16-37
• 2.1 实验材料16
• 2.2 实验仪器16-17
• 2.3 试剂及药品配制17-20
• 2.4 实验耗材20-21
• 2.5 实验方法21-36
• 2.6 统计学处理36-37
• 第三章 实验结果37-48
• 3.1 胃正常粘膜上皮GES-1细胞及胃癌MKN-28细胞中p12-LOX、Ezrin的表达37-38
• 3.2 体外培养的胃癌MKN-28细胞株增殖状态的形态学观察38-40
• 3.3 BAI通过下调p12-LOX基因的表达抑制胃癌MKN-28细胞的增殖能力40-41
• 3.4 BAI通过阻滞MKN-28细胞周期于G0/G1期,抑制细胞增殖41-42
• 3.5 BAI诱导MKN-28细胞凋亡42-46
• 3.6 BAI抑制MKN-28细胞迁移能力和EMT的发生46-47
• 3.8 BAI通过抑制TGF-β/Smad信号通路蛋白表达抑制EMT的发生和迁移、侵袭47-48
• 第四章 讨论48-52
• 4.1 BAI通过下调p12-LOX、Ezrin基因表达,影响胃癌MKN-28细胞的增殖与迁移能力48-49
• 4.2 BAI通过影响细胞周期、诱导细胞凋亡,抑制胃癌MKN-28细胞的增殖能力49
• 4.3 BAI通过诱导细胞EMT形成,抑制胃癌MKN-28细胞的迁移能力49-50
• 4.4 BAI通过TGF-β/Smad、MAPK/ERK信号通路,抑制胃癌MKN-28细胞的增殖与迁移能力50-51
• 4.5 总结51-52
• 第五章 结论52-53
• 参考文献53-59
• 攻读硕士学位期间取得的科研业绩59-60
• 致谢60

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本文编号：960334