硫化砷对胃癌侵袭和转移的抑制作用及其分子机制研究

发布时间：2017-10-03 19:28

  本文关键词：硫化砷对胃癌侵袭和转移的抑制作用及其分子机制研究

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【摘要】：【目的】探讨硫化砷抑制胃癌侵袭转移的作用及其机制,进一步丰富硫化砷个体化治疗胃癌的理论基础,为其临床应用提供科学依据。【方法】选择人胃癌AGS、MGC803细胞株为实验材料;以划痕实验和Transwell侵袭实验分别检测硫化砷对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响;Western blotting法检测硫化砷对胃癌细胞中E-cadherin、β-catenin、Sp1、KLF4、VEGF、等侵袭转移相关蛋白表达的影响;明胶酶谱法检测硫化砷对MGC803细胞金属基质蛋白酶MMP-2、MMP-9分泌水平及活性的影响。裸鼠皮下注射MGC803细胞建立胃癌裸鼠皮下移植瘤模型,连续腹腔注射硫化砷3周,监测裸鼠体重及瘤径变化,计算抑瘤率,并分别用HE和TUNEL染色法检测小鼠瘤组织标本中细胞形态以及凋亡细胞比率。瘤体内侵袭转移相关蛋白和基因的变化则通过免疫组化、Western blotting和RT-PCR法进行检测。【结果】细胞划痕实验和Transwell侵袭实验证明硫化砷对胃癌的迁移和侵袭能力具有明显的抑制作用;Western blotting显示硫化砷能引起MGC803细胞中E-cadherin、K LF4表达增加,Sp1、VEGF表达降低;明胶酶谱法检测表明硫化砷能降低MGC803中MMP-2及MMP-9的活性。体内实验表明硫化砷能明显抑制胃癌移植瘤的生长和侵袭能力,镜下观察瘤组织HE染色和TUNEL染色结果可见硫化砷处理组瘤组织凋亡细胞及其周围浸润的炎性细胞增多;瘤组织免疫组化、Western blotting及RT-PCR结果提示硫化砷抑制肿瘤侵袭转移的作用可能与E-cadherin蛋白表达水平上调,β-catenin、Sp1、VEGF及CD34表达水平下调有关,这一结果与体外研究结果一致。【结论】硫化砷具有抑制胃癌细胞侵袭转移的能力,其抗肿瘤侵袭转移机制可能涉及多种途径。最主要的机制可能是通过上调MMP-2/E-cadherin的上游靶基因KLF4的表达,从而增加肿瘤细胞的粘附能力,减少远处转移。除此之外,这一过程还可能与血管生成受到抑制相关。我们的结果提示,硫化砷可能成为抑制胃癌侵袭转移的有效治疗药物。
【关键词】：硫化砷 As_4S_4 胃癌 侵袭 转移
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.2
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-9
• 英文缩略词表9-13
• 第1章 绪论13-18
• 1.1 课题研究的背景及意义13-15
• 1.2 课题研究的侧重点15
• 1.3 课题研究的具体内容15-16
• 1.4 课题研究的创新性16-17
• 1.5 技术路线图17-18
• 第2章 硫化砷对胃癌细胞迁移和侵袭能力的影响18-28
• 引言18
• 2.1 实验材料18-20
• 2.1.1 药品制备18
• 2.1.2 主要试剂18-19
• 2.1.3 主要仪器与耗材19-20
• 2.1.4 实验细胞株20
• 2.2 实验方法20-23
• 2.2.1 细胞冻存与复苏20-21
• 2.2.2 划痕实验操作步骤21-22
• 2.2.3 Transwell侵袭实验操作步骤22-23
• 2.2.4 统计方法23
• 2.2.5 作图软件23
• 2.3 结果23-27
• 2.3.1 硫化砷对胃癌细胞迁移愈合能力的影响23-26
• 2.3.2 硫化砷对MGC803细胞侵袭能力的影响26-27
• 2.4 结论27-28
• 第3章 硫化砷抑制胃癌细胞侵袭转移的分子机制研究28-38
• 引言28-29
• 3.1 材料29-31
• 3.1.1 实验试剂29-30
• 3.1.2 实验用细胞30
• 3.1.3 主要仪器及耗材30-31
• 3.2 方法31-35
• 3.2.1 溶液配制31-32
• 3.2.2 明胶酶谱法检测硫化砷处理对MGC803细胞分泌金属基质蛋白酶水平的影响32-33
• 3.2.3 Western blotting法检测硫化砷处理对MGC803细胞内侵袭转移相关基因的蛋白水平的影响33-35
• 3.3 统计方法35
• 3.4 结果35-37
• 3.4.1 硫化砷处理24h后对MGC803细胞分泌MMP-2、MMP-9 活性的影响35
• 3.4.2 硫化砷处理24h后MGC803细胞内相关基因蛋白水平的变化35-37
• 3.5 结论37-38
• 第4章 硫化砷调控胃癌侵袭转移的体内实验研究38-57
• 引言38-39
• 4.1 材料39-41
• 4.1.1 药品与试剂39-40
• 4.1.2 实验细胞及动物40
• 4.1.3 主要仪器与耗材40-41
• 4.2 方法41-48
• 4.2.1 动物饲养41
• 4.2.2 胃癌皮下移植瘤模型的构建41-42
• 4.2.3 动物给药42
• 4.2.4 HE染色检测硫化砷对裸鼠瘤组织形态学的改变42-43
• 4.2.5 TUNEL染色法检测硫化砷对裸鼠瘤组织细胞凋亡的影响43-44
• 4.2.6 免疫组织化学方法检测硫化砷对裸鼠瘤组织侵袭转移相关因子的影响44-45
• 4.2.7 estern Blotting法检测硫化砷对裸鼠瘤组织侵袭转移相关蛋白的影响45
• 4.2.8 Realtime PCR法检测硫化砷对裸鼠瘤组织侵袭转移相关基因m RNA水平的影响45-48
• 4.3 统计方法48
• 4.4 结果48-56
• 4.4.1 硫化砷对胃癌细胞裸鼠移植瘤生长能力的影响48-50
• 4.4.2 硫化砷引起胃癌细胞裸鼠移植瘤组织形态的改变及凋亡的发生50-52
• 4.4.3 免疫组化法检测硫化砷对胃癌细胞裸鼠移植瘤侵袭转移相关因子的影响52-53
• 4.4.4 Western Blotting检测硫化砷对胃癌细胞裸鼠移植瘤侵袭转移相关因子蛋白水平的影响53-55
• 4.4.5 RT-PCR法检测硫化砷对胃癌细胞裸鼠移植瘤侵袭转移相关因子mRNA的影响55-56
• 4.5 结论56-57
• 讨论57-64
• 结论64-65
• 参考文献65-71
• 致谢71-73
• 学术论文和科研成果73

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