EZH2蛋白在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及对其细胞增殖的影响

发布时间：2017-10-04 05:31

  本文关键词：EZH2蛋白在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞系的表达及对其细胞增殖的影响

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【摘要】：目的:通过检测EZH2蛋白在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/Tam+细胞)及他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/Tam-细胞)的表达情况,并探讨EZH2对两种乳腺癌细胞株增殖的影响。方法:1.通过Western blot法在MCF-7/Tam+细胞和MCF-7/Tam-细胞中检测EZH2蛋白表达差异。2.采用10 nmol/l的雌二醇和10 nmol/l 4-羟他莫昔芬(4-OHT)分别处理MCF-7/Tam-细胞24 h后检测EZH2蛋白的变化。3.使用LipofectamineTM 2000将靶向抑制EZH2的si RNA(si RNA-EZH2)转染至MCF-7/Tam+细胞,运用实时PCR检测EZH2基因的相对表达量,Western blot法检测EZH2蛋白表达量以验证si RNA的有效性。4.将si RNA-EZH2转染至MCF-7/Tam+和MCF-7/Tam-细胞,采用细胞计数检测细胞数,MTT检测细胞增殖情况(570 nm波长处吸光度值)。结果:1.EZH2蛋白在MCF-7/Tam+细胞中相对表达量为2.237±0.091,高于在MCF-7/Tam-细胞中的相对表达量(1.870±0.114)(t=8.582,P=0.013)。2.与阴性对照组(EZH2相对表达量:0.480±0.017)相比,经10 nmol/l的雌二醇诱导MCF-7/Tam-细胞24 h后EZH2蛋白相对表达量为0.657±0.015,相同浓度的4-羟基他莫昔芬处理MCF-7/Tam-细胞24 h后EZH2蛋白相对表达量为0.423±0.012(F=175.032,P=0.000)。3.转染si RNA-EZH2至MCF-7/Tam+细胞后,EZH2 m RNA相对表达量下降了69%(t=14.061,P=0.005),EZH2蛋白的相对表达量降低了42%(t=15.366,P=0.004),差异有统计学意义。4.细胞计数结果显示与对照组相比,转染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam-细胞组细胞数在第3,4,5天明显下降,差异有统计学意义(F=77.515,P=0.001);转染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam+细胞组与对照组相比,细胞数在第3,4,5天明显下降,差异有统计学意义(F=702.347,P=0.000)。5.MTT结果显示与对照组相比,转染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam-细胞组及转染si RNA-EZH2的MCF-7/Tam+细胞组在570 nm波长处的吸光度值分别降低了43%(t=9.676,P=0.011)、77%(t=65.069,P=0.000),差异有统计学意义。结论:相较于他莫昔芬敏感乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/Tam-细胞),EZH2在他莫昔芬耐药乳腺癌MCF-7细胞(MCF-7/Tam+)细胞中高表达。为确认si RNA的有效性,将靶向EZH2的si RNA(si RNA-EZH2)转染至MCF-7/Tam+细胞之后,EZH2在m RNA水平和蛋白水平均有不同程度的下降。将si RNA-EZH2分别转染至MCF-7/Tam-和MCF-7/Tam+细胞,细胞增殖能力显著降低。
【关键词】：乳腺肿瘤 他莫昔芬 RNAi MCF-7 细胞 EZH2
【学位授予单位】：安徽医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 英文缩略词词表5-7
• 中文摘要7-9
• 英文摘要9-11
• 1 引言11-15
• 2 材料和方法15-29
• 3 结果29-36
• 4 讨论36-42
• 5 结论42-43
• 参考文献43-49
• 附录49-50
• 致谢50-51
• 综述51-60
• 参考文献57-60

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本文编号：968911