沉默DNMT3B上调XAF1的表达促进肝癌细胞HepG2的凋亡

发布时间：2017-10-04 10:32

  本文关键词：沉默DNMT3B上调XAF1的表达促进肝癌细胞HepG2的凋亡

  更多相关文章： XAF1 DNMT3B 肝癌 凋亡

【摘要】：目的探讨沉默DNA甲基转移酶3B(DNMT3B)后对XAF1介导的肝癌细胞HepG2凋亡的影响,并探讨其可能机制。方法将肝癌细胞HepG2分为实验组、阴性对照组、空白对照组。实验组细胞转染DNMT3B干扰质粒(DNMT3B-siRNA),阴性对照组细胞转染空质粒,空白对照组细胞无处理。通过脂质体法介导将DNMT3B-siRNA瞬时转染肝癌细胞HepG2,荧光显微镜下观察转染率。选择转染效率最高时的细胞用于后续实验。甲基化特异性PCR(MSP)分析XAF1基因启动子甲基化情况。Western blot检测各组HepG2细胞DNMT3B、XAF1和Caspase3蛋白的表达。MTT法检测24 h、48 h、72 h、96 h各组HepG2细胞的增殖状态。流式细胞术检测转染DNMT3B-siRNA后细胞凋亡率。结果基因测序结果显示已成功构建DNMT3B干扰质粒。荧光显微镜观察HepG2细胞瞬时转染效率,转染率约为70-80%。MSP分析显示,HepG2细胞中XAF1基因启动子存在明显甲基化,与阴性对照组比较,沉默DNMT3B后,HepG2细胞中XAF1基因启动子甲基化程度明显减弱,非甲基化表达增强(均P0.05)。Western blot结果显示,与阴性对照组比较,沉默DNMT3B后,HepG2细胞中DNMT3B表达显著下调,而XAF1蛋白表达显著上调,Caspase3蛋白表达显著上调(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组相比,以上指标的差异均不具有统计学意义(均P≥0.05)。MTT法检测结果显示,与阴性对照组比较,沉默DNMT3B后24 h(7.82±3.01%)、48 h(16.18±4.22%)、72 h(25.66±3.20%)、96 h(22.8±2.69)HepG2细胞的增殖抑制率明显提高(均P0.05),而阴性对照组与空白对照组相比较,各时间点HepG2细胞抑制率差别不大(均P≥0.05)。流式细胞术结果显示,与阴性对照组比较(4.00±0.76%),沉默DNMT3B后,HepG2细胞的凋亡率(15.30±0.67%)显著增加(P0.05)。结论沉默DNMT3B的表达能抑制人肝癌细胞HepG2的增殖,促进其凋亡,此过程与XAF1的去甲基化后表达上调密切相关。
【关键词】：XAF1 DNMT3B 肝癌 凋亡
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-6
• Abstract6-8
• 主要英文缩略语索引8-10
• 第1章 前言10-12
• 第2章 实验材料与仪器设备12-14
• 第3章 实验方法14-26
• 第4章 实验结果26-34
• 第5章 讨论34-38
• 第6章 结论38-40
• 参考文献40-44
• 综述: XAF1与肿瘤的研究进展44-52
• 参考文献48-52
• 攻读硕士学位期间的科研成果52-54
• 致谢54

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本文编号：970160