17-AAG对EBV阳性肿瘤细胞LMP1表达及细胞增殖的影响

发布时间：2017-10-04 11:04

  本文关键词：17-AAG对EBV阳性肿瘤细胞LMP1表达及细胞增殖的影响

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【摘要】：热休克蛋白90(Heat Shock Proein 90,HSP90)是一种非常重要的分子伴侣,其底物蛋白是许多信号通路中的蛋白激酶和转录因子。潜伏膜蛋白1(Latent membrane protein 1,LMP1)是EB病毒(Epsein Barr Virus,EBV)潜伏感染期表达的主要癌蛋白,HSP90抑制剂17-AAG已被证实能够抑制LMP1表达,其对表达LMP1的EBV阳性肿瘤细胞的影响有待深入研究。目的:探讨HSP90抑制剂17-AAG对EBV阳性肿瘤细胞LMP1表达的影响以及对细胞增殖的抑制作用,明确17-AAG在STAT3信号通路中可能的作用机制。方法:(1)选取表达LMP1的EBV阳性伯基特淋巴瘤细胞系Raji,EBV阳性鼻咽癌细胞系C666及EBV阳性胃癌上皮细胞系GT38作为研究对象,分别施加不同浓度的17-AAG进行处理,采用Quantitative real-time PCR(q RT-PCR)检测不同浓度17-AAG处理对LMP1表达的影响。(2)MTT法检测17-AAG对表达LMP1的EBV阳性胃癌细胞系GT38、不表达LMP1的EBV阳性胃癌细胞系SNU719、EBV阴性胃癌细胞系SGC7901的生长抑制率。(3)Western-blotting检测17-AAG对GT38细胞系中STAT3及其下游抗凋亡基因survivin表达的影响。结果:(1)q RT-PCR方法结果显示,三组细胞系DMSO对照组与空白对照组表达无统计学差异;施加3μM、1μM、0.3μM、0.1μM浓度17-AAG的Raji细胞系中LMP1的表达量分别降低为空白对照组的0.38、0.33、0.65、0.77倍,GT38细胞系降低为空白对照组的0.47、0.52、0.96、0.94倍,C666细胞系降低为空白对照组的0.22、0.18、0.34、0.36倍。三组细胞系各浓度组间表达量均有统计学差异,P0.05。(2)MTT检测结果显示,不同浓度17-AAG对SNU719、SGC7901均有抑制作用,随浓度增加及作用时间延长,抑制率逐渐增大,1μM浓度组抑制率在第六天可达到100%;不同浓度17-AAG对GT38细胞系的抑制作用更加明显,3μM及1μM浓度抑制作用基本相似,在第四天抑制率即可达到100%。(3)Western-blotting结果显示,17-AAG能够使GT38细胞系中STAT3及survivin表达降低。结论:17-AAG能够抑制EBV阳性肿瘤细胞LMP1的表达及肿瘤细胞增殖,其机制可能是通过抑制LMP1参与的STAT3信号转导通路,从而降低下游抗凋亡基因suivivin的表达。
【关键词】：17-AAG LMP1 EB病毒 肿瘤
【学位授予单位】：青岛大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R730.43
【目录】：

• 摘要2-3
• Abstract3-6
• 引言6-8
• 第1章 材料与方法8-15
• 1.1 仪器、试剂和耗材8-10
• 1.2 EBV阳性细胞系的选择10
• 1.3 细胞培养及药物处理10
• 1.4 RNA的提取10-11
• 1.5 Real-time qPCR检测LMP1基因的转录表达11-13
• 1.6 MTT检测细胞增殖13
• 1.7 Western Blotting检测基因蛋白的表达13-14
• 1.8 统计方法14-15
• 第2章 结果15-22
• 2.1 q RT-PCR 检测 EBV 阳性细胞 LMP1 的转录表达15-19
• 2.2 MTT比色法检测细胞增值率19-21
• 2.3 Western-blot检测STAT3信号通路的表达21-22
• 第3章 讨论22-27
• 3.1 HSP90抑制剂 17-AAG对EBV阳性肿瘤LMP1表达的抑制23-24
• 3.2 HSP90抑制剂 17-AAG对EBV阳性肿瘤细胞增殖的抑制24-25
• 3.3 HSP90抑制剂 17-AAG对LMP1所在信号通路的影响25-27
• 结论27-28
• 参考文献28-32
• 综述32-60
• 综述的参考文献48-60
• 攻读学位期间的研究成果60-61
• 致谢61-62

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本文编号：970286