阿霉素诱导多发性骨髓瘤细胞自噬和氧化应激变化及相互作用

发布时间：2017-10-04 15:13

  本文关键词：阿霉素诱导多发性骨髓瘤细胞自噬和氧化应激变化及相互作用

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【摘要】：目的:探讨阿霉素(doxorubicin,DOX)诱导对多发性骨髓瘤细胞系RPMI-8226细胞自噬和活性氧簇(reactive oxidative species,ROS)生成的影响,及其相互作用关系。方法:不同浓度阿霉素诱导RPMI-8226细胞24 h,采用Western blot技术检测细胞内beclin1、LC3等自噬相关蛋白的表达水平。采用DCFH-DA荧光染色法检测RPMI-8226细胞内ROS的水平,荧光显微镜采集图像。采用氧自由基清除剂N-乙酰半胱氨酸(N-acetyl-Lcysteine,NAC)及Tempol处理RPMI-8226细胞后,通过Western blot技术检测阿霉素诱导下细胞内beclin1、LC3等蛋白的表达水平。采用自噬抑制剂3-甲基腺嘌呤(3-methyladenine,3-MA)处理PRMI-8226细胞后,检测阿霉素诱导下细胞内ROS和凋亡的表达水平。结果:RPMI-8226细胞内beclin1、LC3B/LC3A表达水平呈阿霉素剂量依赖性增加,当阿霉素诱导浓度达2 mg/L时,与对照组比较显著增加(P0.05)。采用阿霉素2 mg/L诱导RPMI-8226细胞,通过荧光显微镜观察,ROS水平较对照组明显增加。氧自由基清除剂NAC和Tempol处理RPMI-8226细胞后,beclin1和LC3II/I的表达水平较阿霉素处理组下降。采用自噬抑制剂3-MA处理细胞后,RPMI-8226细胞内ROS和凋亡的水平较阿霉素处理组及对照组增加。结论:阿霉素能促进PRMI-8226细胞内自噬和ROS的生成,阻断自噬能增加阿霉素诱导下ROS和凋亡的水平,抑制ROS后能减少阿霉素作用下多发性骨髓瘤细胞的自噬产生。
【关键词】：自噬 氧自由基 阿霉素 多发性骨髓瘤
【学位授予单位】：重庆医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 英汉缩略语名词对照5-6
• 中文摘要6-8
• 英文摘要8-10
• 前言10-11
• 1 材料、试剂和仪器11-14
• 1.1 材料11
• 1.2 主要试剂11-12
• 1.3 主要实验仪器12-13
• 1.4 主要试剂配制13-14
• 2 实验方法14-16
• 2.1 细胞培养14
• 2.2 Western Blot检测LC3和Beclin1的蛋白表达14-16
• 2.3 DCFH-DA荧光探针检测细胞内总ROS的变化16
• 2.4 流式细胞术annexin V/PI双标法检测细胞凋亡16
• 2.5 统计学处理16
• 3 结果16-20
• 3.1 阿霉素处理后RPMI-8226 细胞LC3和Beclin1表达水平16-17
• 3.2 抗氧化剂NAC和Temol处理后Beclin1和LC317-18
• 3.3 阿霉素、自噬抑制剂及抗氧化剂处理后RPMI-8226 细胞ROS变化18-19
• 3.4 3-MA处理后RPMI-8226 细胞凋亡变化19-20
• 4 讨论20-23
• 全文总结23-24
• 参考文献24-27
• 文献综述 自噬与ROS研究进展及在疾病中的作用27-35
• 参考文献31-35
• 致谢35-36
• 攻读硕士学位期间发表的论文36

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前1条

1 Jessica A Williams;Sharon Manley;Wen-Xing Ding;;New advances in molecular mechanisms and emerging therapeutic targets in alcoholic liver diseases[J];World Journal of Gastroenterology;2014年36期

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本文编号：971354