Notch1底物特异性酶切抑制剂的筛选及其在T-ALL中的作用

发布时间：2017-10-04 15:06

  本文关键词：Notch1底物特异性酶切抑制剂的筛选及其在T-ALL中的作用

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【摘要】：目的:Notch1通路的过度激活在T-ALL发病中起到关键作用。本研究旨在筛查我院T-ALL患儿的NOTCH1基因突变谱,探索其发病机制,阐明NOTCH1基因突变在儿童T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL)中的特征及临床意义;制备抑制Notch1酶切的底物特异性抗体,并检测其特异性抑制Notch1酶切的效用及其对T-ALL细胞的作用,以期开创针对T-ALL的新型、高特异性低毒副作用的辅助治疗手段。方法:随机入选2009年1月至2013年12月在上海儿童医学中心血液肿瘤科进行治疗的78例T-ALL患儿,利用PCR、Sanger测序法筛查NOTCH1基因异二聚体(HD)区及脯氨酸-谷氨酸-丝氨酸-苏氨酸(PEST)区(涵盖26、27、28及34号外显子)的序列,研究我国T-ALL患儿中NOTCH1基因突变的发生率、位点、类型及其与预后的相关性。通过Western blot方法检测T-ALL患儿中的Notch1蛋白活性,并分析其临床相关性;针对Notch1 S2酶切位点制备兔多克隆抗体,并检测其对T-ALL细胞的作用;利用杂交瘤单抗筛选技术,针对S2酶切位点筛选小鼠源性单克隆抗体,并检测其对T-ALL细胞的作用。结果:78例患儿中有43例发生NOTCH1突变,总突变率为55.13%(43/78)。30例单独发生于HD区,3例单独发生于PEST区,10例同时发生于HD与PEST区。12例为既往未曾报道的新突变。所有随访患儿的一年短期缓解率为66.67%(46/69),突变组一年短期生存率为85.37%(35/41),无突变组的一年短期生存率为85.71%(24/28),两者之间无统计学差异(P=0.9678)。Western结果显示针对S2酶切位点制备的兔多抗可与Notch1特异性相结合。流式结果显示该多抗可结合于经Notch1配体DLL4预处理的T-ALL细胞系并促进其凋亡,表明兔多克隆抗体可特异性地、有效地抑制Notch1酶切,从而抑制Notch1通路的活性,阻碍T-ALL细胞增殖。同样地,针对S2酶切位点制备的鼠单克隆抗体Western blot结果和流式结果显示,该单抗具有特异性和有效性。结论:78例T-ALL患儿的NOTCH1基因突变发生率高、位点多样;NOTCH1突变与患儿临床疾病特征及预后相关,突变组初诊时疾病严重程度更高,短期总生存率与无突变组类似,尽管突变组短期复发率较低,但挽救治疗预后更差。针对S2酶切位点制备的兔多克隆抗体及鼠单克隆抗体均具有特异性与有效性。
【关键词】：T细胞型急性淋巴细胞白血病(T-ALL) NOTCH1突变 酶切抑制剂 儿童
【学位授予单位】：上海交通大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-10
• 中英文缩略词对照表10-12
• 绪论12-18
• 课题研究思路18-20
• 第一部分 T-ALL患者的NOTCH1突变的基因图谱的建立及其突变特征与预后的关系20-37
• 1.1 主要试剂20-21
• 1.2 主要仪器21
• 1.3 试验方法21-28
• 1.4 统计学分析28
• 1.5 实验结果及分析28-33
• 1.6 讨论33-37
• 第二部分 针对Notch1 S2酶切位点序列为抗原制备兔多克隆抗体及鼠单克隆抗体并检测其特异性和有效性37-59
• 2.1 实验耗材37
• 2.2 试剂37-38
• 2.3 仪器38-39
• 2.4 主要溶液配制39-40
• 2.5 试验方法40-46
• 2.6 结果-兔多克隆抗体46-50
• 2.7 结果-鼠单克隆抗体50-56
• 2.8 讨论56-59
• 总结59-61
• 总论与展望61-64
• 参考文献64-68
• 致谢68-70
• 攻读硕士期间所发表或录用的论文70

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本文编号：971305