三维培养肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的研究

发布时间：2017-10-04 14:35

  本文关键词：三维培养肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的研究

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【摘要】：目的建立三维细胞模型,观察其细胞形态学变化,研究三维培养对肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的影响,并比较与单层培养的差异,进一步探讨其应用前景。方法1、建立体外人U87脑胶质瘤细胞、人HDF成纤维细胞、共培养相同浓度两种细胞的3D和2D培养模型,荧光相差显微镜观察并记录其形态学变化。2、分别给予不同剂量照射和不同浓度药物处理3D及2D细胞,荧光相差显微镜观察3D及2D形态学变化以及迁移增殖能力,MTT法测定各组细胞存活率。结果1、2D培养人HDF成纤维细胞和共培养细胞呈单层平面分布,人U87脑胶质瘤细胞可在平面聚集成点,3D培养显示人U87脑胶质瘤细胞形成团状聚集,3D共培养细胞显示聚集形态比较贴近单纯培养人HDF成纤维细胞走向。2、2D培养细胞随着药物浓度增加,形态明显改变及部分细胞脱离培养皿,3D细胞培养相同浓度药物则无明显变化甚至人U87脑胶质瘤细胞继续培养依旧能形成3D结构,MTT显示在10μmol/L各组细胞2D及3D培养存活率差异不明显,随着浓度增加各组细胞3D较2D培养存活率明显升高。3、培养六天观察:2D培养U87、HDF、Co-culture三组细胞予2Gy辐照组细胞形态基本正常;8Gy组人U87脑胶质瘤细胞形态萎缩且多数细胞死亡;12Gy组细胞多呈碎片。3D培养结果显示2Gy、4Gy、8Gy及12Gy组和对照组形态无明显区别,但12Gy组增殖能力下降。MTT结果显示除人HDF成纤维细胞2Gy组3D和2D培养无统计学差异(P=0.05),其它组3D细胞存活率明显高于单层培养细胞(P0.05)。进一步延长时间培养结果显示3D培养人U87脑胶质瘤细胞在对照组、2Gy、4Gy、8Gy组均能形成三维结构,随着剂量增加迁移至末端的时间相应变长,12Gy组少部分细胞可迁移至1/2处,无3D结构形成。而2D细胞随着时间延长结果无明显变化4Gy组增殖能力明显降低,12Gy几乎大部分死亡。结论3D培养相对于2D培养的细胞具有耐药性及辐射不敏感性,肿瘤细胞差异更为明显,更能模拟肿瘤细胞及与间质之间的作用过程和作用机制,接近体内细胞生长的微环境,直观的展现肿瘤细胞黏附、侵袭和远处转移的生物学过程。表明3D培养的三维肿瘤细胞结构更接近人体器官结构,培养细胞具有更好的增殖转移能力,更接近于人体实体肿瘤复发与转移的可能机制,对放射增敏剂、化疗药物效果研究、对测定研究肿瘤抗辐射、耐药基因表达改变及信号通路激活改变细胞间质及细胞表型提供更贴近实体肿瘤的实验技术。
【关键词】：三维细胞培养 肿瘤微环境 肿瘤转移及抑制
【学位授予单位】：苏州大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-9
• 前言9-13
• 参考文献11-13
• 第一部分 建立U87、HDF和共培养细胞的 3D细胞培养模型13-21
• 材料和方法13-17
• 结果17-19
• 讨论19-20
• 参考文献20-21
• 第二部分 3D和2D培养肿瘤细胞耐药性及放射敏感性的研究21-33
• 材料和方法21-24
• 结果24-29
• 讨论29-31
• 参考文献31-33
• 小结33-34
• 综述 三维细胞模型在肿瘤实验中的应用34-41
• 参考文献38-41
• 中英文缩略词表41-42
• 攻读学位期间学术活动总结42-43
• 致谢43-44

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本文编号：971234