Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞基因表达谱的影响

发布时间：2017-10-05 19:18

  本文关键词：Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞基因表达谱的影响

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【摘要】：[目的]应用基因芯片和生物信息学技术,研究Pokemon对乳腺癌MCF-7细胞全基因组表达的影响,探讨Pokemon可能影响的细胞生物学功能。[方法]实验分为两个部分。第一部分以处理组稳定性高表达Pokemon的MCF-7乳腺癌细胞及对照组稳定性普通表达Pokemon的MCF-7乳腺癌细胞为研究对象,分别抽提其总RNA,应用芯片技术检测两样本的基因表达谱,之后对芯片数据进行聚类分析、Pathway分析以及GO分析等,并应用Real-time PCR技术验证基因表达谱的结果。再次应用Real-time PCR技术对瞬时转染了Pokemon质粒的MCF-7细胞中TGF-β1和SMAD4的基因表达做进一步验证。第二部分则是应用组织芯片及免疫组织化学染色方法检测208例乳腺癌及边缘组织上的TGF-β1的表达,并分析其与临床病理的关系。[结果]1.在稳定性高表达Pokemon的MCF-7乳腺癌细胞中(OE组),基因表达谱芯片检测结果显示:与稳定性普通表达Pokemon的MCF-7细胞(NC组)相比,有2079个基因有显著差异性表达(倍数改变大于2.0倍),其中上调的有AKT1、WASF2等966个,下调的有TGF-β1、SMAD4等1113个,可见下调的基因数较上调的多。从细胞分化、增殖和转移这三个方面进行聚类分析,发现在稳定性高表达Pokemon的MCF-7细胞中,与细胞增殖和转移相关的差异性基因以下调基因为主,而与细胞分化相关的差异性基因以上调基因为多。2.对差异性基因进行Pathway分析,可见参与免疫反应、适应性免疫反应、脂肪酸、甘油三酯、酮体代谢、肿瘤、P53信号通路的下调差异性基因占据主导,而参与脂质和脂蛋白代谢、凝血过程、发育生物学、MAPK通路的上调差异性基因较多。3.对差异性基因进行GO分析,可见从细胞组成方面分析,在细胞器中下调基因较多;从分子功能方面分析,参与磷酸基团转移酶活性、酶调节活性的基因上调的较多,而在DNA结合以及与核苷酸结合转录因子的基因下调增多;从生物学过程方面分析,在信号转导及与细胞表面受体结合进行细胞转导中下调基因居多,在解剖结构发育、多细胞生物发育及系统发育过程中下调基因也较上调多,且在核酸代谢过程中下调基因仍然居多,而蛋白代谢中上下调基因未见明显差异。可见,下调基因在大部分功能中占据主导。4.挑选出19个差异性表达基因,用Real-time PCR验证其表达,结果与之前差异性表达谱的表达变化大致相同,说明基因表达谱结果可信度高。5.对MCF-7细胞瞬时转染Pokemon质粒后,用Real-time PCR再次检测TGF-β1和SMAD4基因m RNA水平,与之前结果相同均下调。6.TGF-β1在乳腺癌中的表达高于边缘组织中的表达,且差异具有统计学意义(p0.05)。7.在乳腺癌组织中,TGF-β1的表达在不同的年龄、肿瘤类型、核分裂象及是否伴有淋巴转移的乳腺癌组织中的差异结果均无统计学意义(p0.05)。[结论]1、在乳腺癌MCF-7细胞中,Pokemon对参与细胞增殖和转移相关基因的表达以负性调控为主,而对参与细胞分化相关基因的表达以正向调控为主。2、Pokemon下调TGF-β1和SMAD4基因m RNA转录水平。3、TGF-β1在乳腺癌组织中呈现高表达,而在不同年龄、肿瘤类型、核分裂等级及是否伴有淋巴转移的乳腺癌组织中的表达无明显差异。
【关键词】：Pokemon MCF-7细胞 基因表达谱 免疫组化
【学位授予单位】：南华大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要4-7
• Abstract7-10
• 主要缩略语词及英文索引10-12
• 前言12-14
• 第一部分Pokemon对乳腺癌MCF-7 细胞基因表达谱的影响14-42
• 1.1 实验材料14-15
• 1.2 实验方法15-24
• 1.3 实验结果24-42
• 第二部分 乳腺癌组织中TGF-β1 的表达及与临床病理的关系42-47
• 2.1 材料与方法42-44
• 2.2 实验结果44-47
• 讨论47-52
• 结论52-54
• 参考文献54-60
• 综述60-74
• 参考文献68-74
• 附录74-76
• 致谢76

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本文编号：978366