CTA抗原FBXO39在肿瘤细胞中的生物学功能探讨

发布时间：2017-10-05 22:05

  本文关键词：CTA抗原FBXO39在肿瘤细胞中的生物学功能探讨

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【摘要】：肿瘤-睾丸抗原(Cancer-testis antigen, CTA)是一类具有特异性表达模式的肿瘤相关抗原,是肿瘤免疫治疗中的热门靶点之一。FBXO39是一个新发现的CT抗原,属于F-box蛋白家族,具有F-box蛋白家族成员的结构特性,但是目前与之相关的研究很少,其具体功能并不明确。已有研究表明,F-box蛋白家族成员在肿瘤的发生发展中扮演着重要的角色,参与了细胞周期调控、DNA损伤修复、代谢调控等生命活动或生化过程。我们推测,FBXO39作为F-box蛋白家族的一员,可能具有类似的作用。因此,本论文从三个方面对FBXO39在肿瘤细胞中的生物学功能进行了初步探讨：1. FBXO39在人类多器官正常组织与肿瘤及其边缘组织中的表达谱分析利用组织芯片-免疫组化的方法,在人类多器官的正常组织与肿瘤及其边缘组织中检测了FBXO39的表达情况。发现在肿瘤及其边缘组织中FBXO39的表达量普遍高于正常组织,而且与肿瘤的恶化程度呈正相关,提示FBXO39可能发挥原癌蛋白的功能。2.FBXO39在肿瘤细胞中的生物学效应分析在成功构建FBXO39真核表达载体的基础上,通过基因转染、MTT、流式细胞术等实验,发现FBXO39的过表达对MCF7细胞的存活、凋亡与细胞周期的影响不明显。与此同时,通过生物信息学的方法分析,发现FBXO39基因核心启动子区域具有多个与DNA损伤相关的转录因子结合位点,推测其可能参与DNA损伤应答。在此基础上,采用UV-C诱导的MCF7细胞DNA损伤模型,通过定量PCR和Western blot的方法,我们证实了FBXO39在UV-C诱导的DNA损伤条件下表达上调,表明其参与了肿瘤细胞对DNA损伤应答的过程。3. FBXO39基因对肿瘤细胞代谢分子的影响利用代谢组PCR array的方法,在MCF7细胞中筛选出了受FBXO39基因调控的代谢相关基因,并在Ntera2细胞中进行了进一步的确认。最终发现,ACDH9A1、MCT1、 DLAT、HMGCS、FASN、GLUL基因能够在FBXO39的作用下表达上调。综上,我们发现FBXO39基因在人类肿瘤组织的表达要高于正常组织,具有原癌基因的特点,并可能参与肿瘤细胞对DNA损伤的响应和代谢调节。本研究对深入探索FBXO39在肿瘤中的功能具有积极意义。
【关键词】：FBXO39 CT抗原 组织表达谱 DNA损伤 肿瘤代谢
【学位授予单位】：湖南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R73-3
【目录】：

• 摘要5-6
• Abstract6-12
• 主要缩略词表12-14
• 第1章 绪论14-30
• 1.1 CT抗原14-16
• 1.1.1 CT抗原的分类14
• 1.1.2 CT抗原的表达特点14-15
• 1.1.3 CT抗原与肿瘤15-16
• 1.2 F-box蛋白家族简介16-24
• 1.2.1 F-box蛋白的结构特点16-18
• 1.2.2 F-box蛋白的功能18-20
• 1.2.3 F-box蛋白调节的信号通路20
• 1.2.4 F-box蛋白家族在肿瘤中的功能分类20-24
• 1.3 F-box蛋白与DNA损伤24-26
• 1.3.1 DNA损伤与肿瘤发生24-25
• 1.3.2 F-box蛋白与DNA损伤25-26
• 1.4 F-box蛋白与肿瘤细胞代谢26-27
• 1.4.1 肿瘤细胞的代谢特点26
• 1.4.2 与肿瘤细胞代谢相关的F-box蛋白26-27
• 1.5 FBXO39基因的简介27
• 1.6 论文研究思路27-30
• 第2章 FBXO39在多种正常组织与肿瘤组织中的组织表达谱分析30-40
• 2.1 前言30
• 2.2 材料与方法30-32
• 2.2.1 实验仪器30-31
• 2.2.2 材料与试剂31
• 2.2.3 实验方法31-32
• 2.3 实验结果与讨论32-38
• 2.3.1 FBXO39在多种器官正常组织和肿瘤组织中的表达情况32-35
• 2.3.2 比较FBXO39在正常组织和肿瘤组织中的表达情况35-38
• 2.4 小结38-40
• 第3章 FBXO39在肿瘤细胞中的生物学效应分析40-59
• 3.1 前言40
• 3.2 材料与方法40-52
• 3.2.1 实验仪器40-41
• 3.2.2 材料与试剂41-42
• 3.2.3 实验方法42-52
• 3.3 实验结果与讨论52-58
• 3.3.1 外源表达FBXO39对肿瘤细胞生物学行为的影响52-55
• 3.3.2 生物信息学对FBXO39的启动子区域的分析55-56
• 3.3.3 FBXO39对UV-C诱导的DNA损伤信号的响应56-58
• 3.4 小结58-59
• 第4章 FBXO39对肿瘤细胞代谢分子的影响59-66
• 4.1 前言59
• 4.2 材料与方法59-61
• 4.2.1 实验仪器59-60
• 4.2.2 材料与试剂60
• 4.2.3 实验方法60-61
• 4.3 实验结果与讨论61-65
• 4.3.1 外源FBXO39在MCF7、Ntera2细胞中的转染效率检测61-62
• 4.3.2 PCR array方法筛选MCF7中受FBXO39调节的代谢基因62-64
• 4.3.3 在Ntera2细胞中验证受FBXO39调节的代谢基因64-65
• 4.4 小结65-66
• 结论66-67
• 参考文献67-77
• 附录A 攻读硕士学位期间发表的论文77-78
• 致谢78

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本文编号：979066