影响硫氧还蛋白亚细胞定位的甘草有效组分研究

发布时间：2017-10-06 08:27

  本文关键词：影响硫氧还蛋白亚细胞定位的甘草有效组分研究

  更多相关文章： 甘草 硫氧还蛋白 亚细胞定位 有效组分 表达

【摘要】：当前国家社会快速进步,百姓生活消费实力也在稳步提升。然而由于发展所带来的一系列污染问题以及人们长期养成的不良生活习惯等方面,都可能会导致人体内部正常的细胞周期发生紊乱,进而会使细胞生理功能等方面出现严重失调,最终恶化演变为“癌症”。硫氧还蛋白(Thioredoxin-1,Trx)属于分布比较宽泛的小分子多功能蛋白,其在进化上比较保守且同属氧化还原类蛋白家族。目前对多种肿瘤细胞系的研究显示,Trx表达水平与肿瘤细胞耐药性之间存在正比例关系;与此同时,相关临床探索也证实了Trx表达水平较高的癌症病人更容易对多种化疗药物产生显著抗药性。这主要是由于化疗药物可刺激Trx入核使其保持还原状态,进而通过增强相关转录因子的活性使肿瘤细胞具有抵抗凋亡继而抗药的能力。因此将Trx作为一个潜在抗癌治疗靶点具有非常重要的价值意义。中医在我国的发展历史悠久,由于其来源丰富且毒副作用小,因此广受病患青睐。所以探寻有效抗癌天然药物的任务也十分紧迫。本论文主要通过采用甘草天然混合组分及其主要单药活性成分作用于人宫颈癌HeLa细胞,从而使用相关方法与手段对Trx在亚细胞中的定位作用进行了一系列探究。首先,采用复方甘草片(其内主要成分为甘草浸膏)作为实验药物设置相同药物浓度不同作用时间实验组和相同作用时间不同药物浓度实验组。Western blot结果显示两组中,Trx在其细胞核与细胞浆内的表达变化均随着药物浓度的增大和作用时间的延长呈现下降趋势。因此推测在甘草中存在相关有效组分,从而对Trx在亚细胞中的定位下降起到了重要作用。然后,依次采用甘草酸(皂苷类药物)、甘草苷(黄酮类药物)两种主要单药活性成分作为实验药物设置相同药物浓度不同作用时间实验组和相同作用时间不同药物浓度实验组。Western blot结果发现两组中,Trx在其细胞核与细胞浆的定位表达均伴随着药物浓度增大与作用时间延长呈下降趋势。因此证明了这两种单药活性成分对于Trx在亚细胞中的定位下降起到了重要作用,它们即为甘草中能够抑制Trx入核的有效组分。与此同时,再将三七皂苷R1(皂苷类药物)和芸香叶苷(黄酮类药物)两种佐证药物按照上述实验设置作用HeLa细胞,Western blot结果发现二者对Trx在亚细胞中的含量变化无明显作用。因此说明了甘草酸、甘草苷对于Trx在亚细胞中的定位下降是非常有效的。最后,再将甘草酸、甘草苷两种单药分别与抗癌药物顺铂、紫杉醇、表柔比星进行“两两联合”设置药物实验组。Western blot及四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法结果表明甘草对细胞毒性较弱,且当使用的化疗药物保持低剂量浓度时,随着甘草酸/甘草苷药物浓度增加,Trx在其细胞核、细胞浆中的表达均呈逐渐下降趋势;与此同时,两种单药和低剂量化疗药物联合应用对细胞的生长抑制情况可与单纯高剂量化疗药物作用效果相似。因此通过联合用药有望降低化疗药物使用剂量,从而在提升癌症治疗效果及减轻对患者的毒副作用方面显示出了一定的潜在临床意义。
【关键词】：甘草 硫氧还蛋白 亚细胞定位 有效组分 表达
【学位授予单位】：武汉工程大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 摘要5-7
• Abstract7-13
• 第1章 文献综述13-34
• 1.1 前言13-14
• 1.2 肿瘤细胞14-17
• 1.2.1 肿瘤细胞的特点14-16
• 1.2.2 肿瘤细胞形成的原因与过程16-17
• 1.3 硫氧还蛋白简介17-24
• 1.3.1 硫氧还蛋白研究进展17-19
• 1.3.2 硫氧还蛋白结构特点19-20
• 1.3.3 硫氧还蛋白生物活性20-22
• 1.3.4 硫氧还蛋白与各种疾病22-24
• 1.4 硫氧还蛋白系统与肿瘤之间关系24-27
• 1.4.1 硫氧还蛋白在肿瘤机理方面研究24-26
• 1.4.2 硫氧还蛋白与肿瘤治疗26-27
• 1.5 相应天然药物概述27-33
• 1.5.1 甘草的化学成分27-28
• 1.5.2 甘草酸/甘草苷相关作用28-31
• 1.5.3 三七皂苷R131-32
• 1.5.4 芸香叶苷32-33
• 1.6 本课题研究目的与意义33-34
• 第2章 实验材料与方法34-44
• 2.1 实验材料34-37
• 2.1.1 细胞及培养基34
• 2.1.2 主要试剂34-35
• 2.1.3 主要仪器设备35
• 2.1.4 主要溶液配制35-37
• 2.2 实验方法37-44
• 2.2.1 细胞操作方法37-39
• 2.2.2 实验分组方法39-40
• 2.2.3 细胞浆蛋白与细胞核蛋白抽提方法40-41
• 2.2.4 BCA蛋白浓度测定方法41-42
• 2.2.5 SDS-PAGE电泳方法42
• 2.2.6 Western blot检测方法42-43
• 2.2.7 MTT检测方法43-44
• 第3章 结果与分析44-59
• 3.1 Western blot检测实验组结果分析44-56
• 3.1.1 复方甘草片对硫氧还蛋白亚细胞定位的影响44-45
• 3.1.2 GCA/LQ对硫氧还蛋白亚细胞定位的影响45-48
• 3.1.3 三七皂苷R1对硫氧还蛋白亚细胞定位的影响48-49
• 3.1.4 芸香叶苷对硫氧还蛋白亚细胞定位的影响49-51
• 3.1.5 联合用药对硫氧还蛋白亚细胞定位的影响51-56
• 3.2 MTT比色法检测实验组结果分析56-59
• 第4章 结论与建议59-61
• 4.1 结论59-60
• 4.2 建议60-61
• 参考文献61-67
• 攻读硕士期间已发表的论文67-68
• 致谢68

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本文编号：981781