磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在原发性肝癌中的表达水平分析及其作为CAR-T靶向分子的可行性研究

发布时间：2017-10-07 15:32

  本文关键词：磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在原发性肝癌中的表达水平分析及其作为CAR-T靶向分子的可行性研究

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【摘要】：背景:原发性肝癌是我国最常见的消化系统恶性肿瘤之一。世界卫生组织报告资料显示原发性肝癌的发病率在所有肿瘤中位于第5位,死亡率位于第3位。也有报道显示其发病率和死亡率逐渐年轻化。目前针对原发性肝癌的各种治疗策略都不能显著延长肝癌患者的有效生存期。近年来,肿瘤免疫治疗取得飞速发展,在细胞免疫治疗上取得突破性进展,CAR-T技术的发展为肝癌的治疗带来新的曙光。有学者通过基因融合的技术制备出glypican-3特异性CAR-T细胞,并通过体内外实验证实glypican-3特异性CAR-T具有有效杀伤glypican-3阳性肝细胞癌细胞的潜能。目的:通过RT-PCR和组织免疫化学法检测原发性肝细胞性肝癌、胆管细胞性肝癌及正常肝组织细胞中glypican-3的分子表达,对比分析,探讨磷脂酰肌醇蛋白聚糖3在原发性肝癌中的分子表达水平及其作为CAR-T靶向分子的可行性。方法:收集2012年3月至2015年10月期间山西医科大学第一医院普通外科手术切除的肝癌组织标本,筛选出经该院病理科病理诊断为肝细胞性肝癌72例,胆管细胞性肝癌27例;另外收集因肝内胆管结石切除的正常肝组织4例做对照,采用RT-PCR和免疫组织化学法检测glypican-3mRNA和glypican-3蛋白的表达,通过对比分析glypican-3在肝细胞性肝癌、肝胆管细胞性肝癌及正常肝组织中表达的特异性。结果:1、72例肝细胞性肝癌中61例检测到glypican-3mrna和glypican-3蛋白阳性表达上调,阳性表达率84.72%,27例肝胆管细胞性肝癌中5例检测到glypican-3mrna和glypican-3蛋白阳性表达上调,阳性表达率18.52%。4例正常肝组织中位检测到glypican-3mrna和glypican-3蛋白阳性表达上调。2、glypican-3蛋白表达主要位于肝癌的癌细胞浆和细胞膜上,且glypican-3蛋白表达与肝细胞性肝癌的分化程度密切相关,49例高分化肝细胞癌中37例glypican-3蛋白成强阳性表达,12例成弱阳性表达,阳性率100%;而在14例中分化肝细胞癌中,glypican-3呈强阳性表达8例,弱阳性表达2例,阴性表达4例,阳性表达率71.43%;在9例未分化肝细胞癌中2例glypican-3蛋白表达成弱阳性,7例阴性表达,阳性表达率22.22%;x2=32.451,p0.001,差异有统计学意义。3、glypican-3在肝胆管细胞性肝癌中呈极少量表达,27例肝胆管细胞性肝癌中glypican-3呈强阳性表达2例,弱阳性3例,阴性22例,阳性表达率18.52%(5/27例);其阳性表达率与肝胆管细胞性肝癌分化程度相关。10例高分化肝胆管细胞癌中2例成glypican-3蛋白强阳性高表达,2例成弱阳性表达,阳性表达率14.81%;而在16例中分化肝胆管细胞癌中,glypican-3强阳性表达0例,弱阳性表达1例,阴性表达15例,阳性表达率3.70%;在1例未分化肝胆管细胞癌中1例glypican-3蛋白表达阴性,阳性表达率0.00%;p=0.045,差异有统计学意义,而肝胆管细胞癌中glypican-3蛋白的表达与患者临床病理学参数,如性别、年龄、肿瘤大小、临床分期、肝炎等无关,p0.05,差异无统计学意义。4、glypican-3蛋白在肝细胞性肝癌组呈广泛表达上调,阳性表达率84.72%(61/72例),而在肝胆管细胞性肝癌中仅极少量表现为表达上调,阳性表达率18.52%(5/27例),在4例正常肝组织均未检测到有glypican-3蛋白的表达上调,x2值为44.369,p0.001,差异有统计学意义。结论:glypican-3在原发性肝细胞性肝癌的细胞膜中成广泛高表达,并具有高度特异性,可以用于原发性肝细胞性肝癌的早期诊断,并可以作为原发性肝细胞性肝癌CAR-T治疗的特异性靶向分子标志物。
【关键词】：原发性肝癌 磷脂酰肌醇蛋白聚糖3 靶向分子 可行性 CAR-T
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要6-9
• Abstract9-13
• 常用缩写词中英文对照表13-14
• 前言14-16
• 1 实验材料和方法16-23
• 1.1 临床材料16
• 1.2 主要试剂16-17
• 1.3 实验仪器17-18
• 1.4 Glypican-3 引物设计18
• 1.5 组织中glypican-3mRNA的提取实验步骤18-20
• 1.6 Glypican-3mRNA的PCR扩增20
• 1.7 2%琼脂糖凝胶电泳实验方法与步骤20-21
• 1.8 免疫组化法检测组织中glypican-3 蛋白表达的方法及步骤21-22
• 1.9 结果判定22
• 1.10 统计处理22-23
• 2 结果23-29
• 2.1 Glypican-3mRNA在肝细胞性肝癌中表达23
• 2.2 Glypican-3 mRNA在肝胆管细胞性肝癌中表达23-24
• 2.3 Glypican-3 mRNA在正常肝组织中表达24-25
• 2.4 Glypican-3 蛋白在肝细胞性肝癌中的表达25
• 2.5 Glypican-3 蛋白在肝胆管细胞性肝癌和正常肝组织中的表达25-26
• 2.6 Glypican-3 蛋白的表达与肝细胞性肝癌临床病理特征的关系26-27
• 2.7 Glypican-3 蛋白的表达与肝胆管细胞性肝癌临床病理特征的关系27-28
• 2.8 Glypican-3 在肝细胞性肝癌、肝胆管细胞性肝癌及正常肝组织中表达的对比分析28-29
• 3 讨论29-33
• 4 结论33-34
• 参考文献34-36
• 综述36-45
• 参考文献42-45
• 附录45-47
• 致谢47-48
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果48-49
• 个人简历49

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