模拟缺血再灌注损伤诱导Hepg2细胞多药耐药相关基因与蛋白的表达及意义

发布时间：2017-10-07 18:45

  本文关键词：模拟缺血再灌注损伤诱导Hepg2细胞多药耐药相关基因与蛋白的表达及意义

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【摘要】：目的:我国肝细胞癌(Hepatocellular Carcinoma,HCC)的发病率及死亡率仅次于肺癌。我国HCC多发现于中晚期。化疗是治疗进展期HCC、晚期HCC主要手段之一。相关研究表明目前多数HCC对化疗不敏感,多药耐药(Multidrug Resistance,MDR)相关基因及蛋白的高表达是主要原因之一。在HCC的规范化治疗中,手术切除和肝移植为主的综合治疗仍然是主要手段,手术过程中常常会使用肝门阻断甚至是全肝血流控制以有效的减少出血,但肝脏恢复供血后会出现缺血再灌注损伤(Ischemia Reperfusion Injury,IRI),如果损伤严重反而会增加手术风险甚至导致术后肝衰竭。有研究表明肿瘤细胞细胞长处于缺氧、低糖的微环境中其MDR相关基因和蛋白的表达会增加,导致化疗效果差甚至耐药,而且缺氧会引起缺氧诱导因子1α(Hypoxia-Inducible Factor 1α,HIF-1α)的表达。研究发现HIF-1α可以调控MDR相关基因表达,沉默或者增强HIF-1α的表达,可以降低或者增强MDR相关基因的表达,表明HIF-1α是导致肿瘤细胞MDR的原因之一。因此为了进一步深入了解IRI对Hepg2细胞MDR的影响,本实验采用Hepg2细胞模拟缺血再灌注损伤模型,探索IRI对Hepg2细胞MDR相关基因、蛋白以及HIF-1α的影响,探讨HIF-1α与多耐药基因1(Multidrug Resistance Gene1,MDR1)、多药耐药蛋白2(Multidrug Resistance associated Protein 2,MRP2)、肺耐药蛋白(Lung Resistance Protein,LRP)的关系。方法:建立体外Hepg2细胞模拟缺血再灌注损伤模型。细胞分组情况:空白对照组,无缺血、再灌处理;缺血再灌注实验组,均予以缺血40min处理,分别再灌注0h、6h、12h、24h、48h处理。光镜下观察hepg2细胞干预后形态改变。实时荧光定量pcr检测mdr1、mrp2、lrp以及hif-1α基因表达,westblot法检测hepg2细胞p-糖蛋白(p-glycoprotein,p-gp)、mrp2、lrp、hif-1α蛋白的表达。采用统计分析软件spss17.0进行对所有数据分析,组间比较单因素方差分析(one-wayanova检验)。检验水准α=0.05,p0.05为差异有统计学意义。结果:模拟缺血再灌注损伤后细胞形态较正常细胞形态不一,死细胞明显增多,细胞间隙增宽。各实验组分别与空白对照组比较:从ir-6h组开始mdr1表达具有统计学差异(f=116.16,p0.05),最高的ir-48h组为对照组3倍;从ir-0h组开始mrp2基因表达具有统计学差异(f=133.81,p0.05),最高的ir-48h组为对照组2.5倍;从ir-12h组开始lrp基因表达具有统计学差异(f=146.64,p0.05),最高的ir-48h组为对照组3倍;从ir-24h组开始hif-1α基因表达具有统计学差异(f=113.01,p0.05),最高的ir-48h组为对照组3倍。从ir-0h组开始p-gp表达具有统计学差异(f=83.75,p0.05),最高的ir-48h组为对照组5倍;从ir-0h组开始mrp2蛋白表达具有统计学差异(f=52.70,p0.05),最高的ir-48h组为对照组2倍;从ir-48h组开始lrp蛋白表达具有统计学差异(f=2.01,p0.05),最高的ir-48h组为对照组17倍;从ir-0h组开始hif-1α蛋白表达具有统计学差异(f=88.44,p0.05),最高的ir-12h组为对照组1.9倍。结论:1.模拟缺血再灌注参与了hepg2细胞mdr相关基因mdr1、mrp2、lrp以及其相应蛋白p-gp、mrp2、lrp的表达增加;2.模拟缺血再灌注可以诱导hepg2细胞hif-1α的基因和蛋白表达增加;3.模拟缺血再灌注诱验证了HIF-1α对MDR1表达的调控。
【关键词】：缺血再灌注 缺氧诱导因子1α 多药耐药
【学位授予单位】：四川医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要3-6
• 英文摘要6-9
• 前言9-15
• 材料与方法15-25
• 结果25-35
• 讨论35-42
• 结论42-43
• 参考文献43-50
• 英汉缩略词对照表50-51
• 致谢51-53
• 肝缺血再灌注损伤机制及相关保护措施的研究进展(综述)53-69
• 参考文献63-69

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前4条

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本文编号：989493