JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株SUP-B15的增殖抑制和相关作用机制研究

发布时间：2017-10-07 18:47

  本文关键词：JQ1对Ph阳性急性淋巴细胞白血病细胞株SUP-B15的增殖抑制和相关作用机制研究

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【摘要】：目的:Ph阳性急性淋巴细胞白血病(Ph+ALL)是急性淋巴白血病中,预后较差的类型之一,化疗及靶向药物治疗虽然能够一定程度控制疾病的发展,但是多数会由于耐药等问题复发,所以寻找更好的治疗方法是十分必要。近年来国外研究发现JQ1(溴区抑制剂)可抑制慢性髓细胞白血病(CML)耐药的BCR-ABLT315I(T315基因突变)细胞活性,增加其凋亡率,同时抑制布罗莫结构域4(Brd4),降低myc的m RNA水平及myc的结合活性,克服CML耐药;而Ph+ALL也具有与CML相似BCR-ABL基因的突变,那么Brd4抑制剂JQ1对Ph+ALL是否有同样的作用,该研究国内外少见研究报道。本研究拟采用JQ1作用于Ph+ALL细胞株(SUP-B15),通过光镜下进行细胞形态学的观察、MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测JQ1作用于SUP-B15细胞株的半数抑制浓度、FCM(流式细胞术)检测细胞凋亡率、采用荧光定量PCR检测BCR-ABL,同时检测Brd4及其下游两个通道基因表达即myc、P53m RNA基因的表达。目的是探讨JQ1对Ph+ALL细胞株的可能作用机制,为临床应用提供理论基础,为Ph+ALL的治疗探索一个新的靶向治疗方法及提供新的思路。方法:1.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测JQ1作用于SUP-B15的细胞后,细胞的增殖抑制率;2.Annexin V-FITC/PI荧光染色FCM(流式细胞术)检测JQ1作用于SUP-B15细胞后,细胞的凋亡率的改变;3.实时荧光定量PCR(Real-time PCR)检测JQ1作用于SUP-B15细胞后,细胞的相关基因BCR-ABLm RNA、Brd4m RNA、mycm RNA以及P53m RNA的表达。结果:1.MTT(四甲基偶氮唑蓝)法检测得到的结果为:不同浓度JQ1处理SUP-B15细胞24h、48h、72h后,各实验组与对照组相比,JQ1对细胞有明显的增殖抑制作用,并且随着作用时间延长及JQ1药物浓度增加,细胞的增殖抑制率呈现升高趋势,可以发现呈现时间-剂量依赖性,经统计学软件进行处理后发现差异有统计学意义(P均0.05且0.01)。其48h半数抑制浓度(IC50)为2.576umol/L。2.FCM(流式细胞术)法检测得到的结果为:荧光染色流式细胞术检测,实验重复三次后48h平均凋亡率分别为对照组(3.57±0.95)%、1umol/L实验组(19.90±1.40)%、4umol/L实验组(35.77±1.72)%,72h平均凋亡率分别为对照组(17.77±1.75)%、1umol/L实验组(36.40±2.29)%、4umol/L实验组(78.83±1.40)%,且各时段两个实验组凋亡率明显比对照组高,经统计学软件进行处理后发现差异有统计学意义(F48=925.275,F72=858.642,P均0.05且0.01)。3.实时荧光定量PCR检测得到的结果如下:SUP-B15细胞分别经1umol/L及4umol/L的JQ1处理48h后,BCR-ABLm RNA、Brd4m RNA、mycm RNA表达量较对照组明显下降,1umol/L组分别下降65.67%、8.67%、38.67%,4umol/L分别下降90.00%、67.00%、90.67%;而P53m RNA的表达则随着浓度增加逐渐增高,在1umol/L及4umol/L组分别增高206.33%、278.33%。各实验组与对照组相比,上述四个指标方面,经统计学软件进行处理后发现差异均有统计学意义(P0.01)。结论:1.JQ1作用于SUP-B15细胞后表现为对其明显的增殖抑制作用,表明其可以诱导SUP-B15细胞发生凋亡;2.JQ1可通过下调Brd4 m RNA的表达,从而影响其下游基因myc m RNA及P53m RNA的表达,提示JQ1作用于SUP-B15细胞后,对以上三个基因的表达均具有明显作用,证明Brd4→myc→P53途径可能是JQ1诱导SUP-B15细胞发生凋亡的途径之一;3.JQ1可以有效降低SUP-B15细胞株的BCR-ABL m RNA的转录水平,提示该药对BCR-ABL m RNA表达有明显作用,这可能是细胞凋亡的另一途径。
【关键词】：JQ1 布罗莫结构域4 SUP-B15细胞 急性淋巴细胞白血病
【学位授予单位】：山西医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.71
【目录】：

• 中文摘要5-8
• 英文摘要8-11
• 前言11-13
• 1 材料和方法13-20
• 1.1 材料13-14
• 1.2 方法14-20
• 2 结果20-26
• 2.1 JQ1 对SUP-B15 细胞增殖的抑制作用20
• 2.2 JQ1 对SUP-B15 细胞凋亡的影响20-22
• 2.3 JQ1 作用于SUP-B15 细胞后对基因表达的影响22-26
• 3 讨论26-30
• 4 结论30-31
• 参考文献31-35
• 综述35-49
• 参考文献44-49
• 致谢49-50
• 在学期间承担/参与的科研课题与研究成果50-51
• 个人简历51

【参考文献】

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1 陈国柱;于晓Y，

本文编号：989506