肾细胞癌中DACT2基因启动子区甲基化状态与mRNA表达的研究

发布时间：2017-10-08 00:11

  本文关键词：肾细胞癌中DACT2基因启动子区甲基化状态与mRNA表达的研究

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【摘要】：目的:肾细胞癌(Renal Cell Carcinoma,RCC)是一种比较常见的泌尿系统恶性肿瘤,其发病率在泌尿系肿瘤中仅次于膀胱癌居第二位。由于RCC的恶性程度较高,初期症状不明显,使得大量患者延误诊治,严重影响患者的治愈率和生存率。近年来大样本的流行病学研究表明,RCC发病率呈逐年上升趋势,且发病年龄日趋年轻化,因此RCC的早期诊断与治疗是近期研究的热点。表观遗传学是一门研究DNA序列不变而其基因表达发生遗传性改变的遗传学分支学科。表观遗传学改变表现为:DNA核苷酸胞嘧啶的甲基化修饰、组蛋白修饰、非编码RNA干扰的调节等。近年来,DNA甲基化是表观遗传学的研究热点。研究发现,DNA甲基化的发生与许多癌症的发生发展密切相关,其中包括RCC。DACT2基因是DCAT家族的一员,其定位于人类染色体6q27。研究表明,DACT2基因的表达在泌尿系的输尿管以及肾脏集合管的形成发育过程中十分重要。同时,DACT2基因具有控制集合管的形态学发生的作用。有文献报道,DACT2基因能通过抑制Wnt信号通路进而抑制肝癌的发生发展。同时,DACT2基因在肝癌、肺癌、胃癌、食管癌以及结肠癌等中均表达降低。国内外已有大量的实验研究表明,许多癌症发生时,DACT2基因因启动子区发生甲基化而表达沉默进而失去其抑制癌症发生发展的作用。但是RCC的发生发展是否与DACT2基因发生甲基化相关,迄今为止仍未见报道。本研究以59例RCC患者术后标本为研究对象,通过分析RCC组织、癌旁组织以及相应正常肾组织中DACT2基因的启动子区甲基化状态及其mRNA的相对表达水平,并联系临床数据进行相关分析,旨在进一步揭示RCC的发病机制,为RCC的早期发现、诊治与预后的判断提供相应的实验理论依据。方法:1应用甲基化特异性聚合酶链反应(Methylation Specific PCR,MSP)检测59例RCC患者术后标本的正常肾组织、癌旁组织及癌组织中DACT2基因启动子区甲基化状态。并对DACT2基因异常甲基化状态与RCC的发生发展及临床资料进行相关统计学数据分析。2用逆转录-聚合酶链反应(Reverse Transcriptase-PCR,RT-PCR)技术检测59例RCC患者术后标本的正常肾组织、癌旁组织及癌组织中DACT2基因的mRNA相对表达量。并对DACT2基因mRNA在RCC中的相对表达量与临床资料进行相关统计学数据分析。3将59例RCC组织按照是否发生甲基化分为发生甲基化的RCC组(简称甲基化组)和未发生甲基化的RCC组(简称非甲基化组)。分析两组间DCAT2基因mRNA相对表达量的差异,用以初步探讨RCC组织中DACT2基因mRNA相对表达量降低是否与其甲基化的发生相关。4应用统计软件SPSS16.0对实验结果进行统计学分析。结果:1 RCC患者术后标本中DACT2基因在各组织中发生甲基化状态的分析。根据MSP后电泳结果可将RCC患者术后标本中DACT2基因的甲基化状态分为:完全甲基化状态,不完全甲基化状态和完全非甲基化状态。其中完全甲基化状态和不完全甲基化状态记为甲基化阳性,完全非甲基化状态记为甲基化阴性。DACT2基因在59例正常肾组织、59例癌旁组织和59例RCC组织中的甲基化发生率分别为5.08%(3/59),6.78%(4/59),45.76%(27/59)。三组间存在统计学差异(P0.05),RCC组织中DACT2基因甲基化阳性率明显高于癌旁组织(P0.05)及正常组织(P0.05)。而癌旁组织及正常组织中DACT2基因甲基化发生率间比较未见明显统计学差异(P0.05);2 RCC患者术后标本中DACT2基因启动子区甲基化状态与临床资料之间的研究。在各组织中DACT2基因启动子区甲基化的发生率与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、Fuhrman分级(组织学分级)等临床资料间均未见明显统计学差异(P0.05);3 RCC患者术后标本中DACT2基因mRNA在各组织中相对表达量的分析。DACT2基因在59例正常组织、59例癌旁组织和59例RCC组织中的相对表达量分别为(0.872±0.022,0.801±0.047,0.427±0.025)。正常及癌旁组织中DACT2基因mRNA的相对表达量均高于RCC组织,且有显著统计学差异(P0.05)。正常及癌旁组织中DACT2基因mRNA的相对表达量间未见明显统计学差异(P0.05);4 RCC患者术后标本中DACT2基因mRNA相对表达量与临床资料之间的研究。在各组织中DACT2基因mRNA相对表达量与患者的年龄、性别、肿瘤大小、临床分期、组织学分级等临床资料间均未见明显统计学差异(P0.05);5甲基化组中DACT2基因的mRNA相对表达量显著低于非甲基化组中DACT2基因的mRNA相对表达量(P0.05),具有统计学差异。结论:1.RCC组织中DACT2基因启动子区异常甲基化可能与RCC的发生有关,但与RCC的临床进展无关。2.RCC组织中DACT2基因相对表达量降低可能与RCC的发生有关,但与RCC的进展无关。3.RCC组织中DACT2基因启动子区异常甲基化可能是导致其mRNA表达降低的主要原因。
【关键词】：肾细胞癌 DACT2 启动子区 甲基化 聚合酶链反应 mRNA
【学位授予单位】：河北医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R737.11
【目录】：

• 中文摘要4-7
• 英文摘要7-10
• 英文缩写10-11
• 前言11-13
• 材料与方法13-24
• 结果24-25
• 附图25-27
• 附表27-30
• 讨论30-33
• 结论33-34
• 参考文献34-37
• 综述 肾细胞癌中Wnt通路相关抑癌基因甲基化的研究进展37-48
• 参考文献43-48
• 致谢48-49
• 个人简历49

【参考文献】

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1 Tadateru Maehata;Hiroaki Taniguchi;Hiroyuki Yamamoto;Katsuhiko Nosho;Yasushi Adachi;Nobuki Miyamoto;Chie Miyamoto;Noriyuki Akutsu;Satoshi Yamaoka;Fumio Itoh;;Transcriptional silencing of Dickkopf gene family by CpG island hypermethylation in human gastrointestinal cancer[J];World Journal of Gastroenterology;2008年17期

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本文编号：990867