SPINK1在肝癌患者血浆中表达情况的研究

发布时间：2017-10-08 01:17

  本文关键词：SPINK1在肝癌患者血浆中表达情况的研究

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【摘要】：背景与目的肝癌是世界第五大常见肿瘤,居恶性肿瘤死亡率排名的第三位。肝细胞癌(hepatocellular carcinoma,HCC)是肝癌最主要的表现形式,约占肝癌的70%到85%。有统计学表明,在出现症状后诊断出肝癌的患者,其5年生存率仅为0%~10%,而当在肝癌早期诊断后并经过手术治疗后,其5年生存率则可以达到70%,所以对于肝癌患者来说,早期的诊断非常重要。目前,在临床上广泛应用的肝癌的血清学标志物是甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP),然而在临床工作中发现AFP阴性的肝癌患者占肝癌患者总数的比例却高达30%,可见其对肝细胞癌患者的诊断及预后预测具有局限性,所以研究者试图寻找新的用于肝癌诊断的血清标志物。丝氨酸蛋白酶抑制剂(serine protease inhibitors,SERPIN)是分布最广、规模最大的蛋白酶抑制剂超家族,丝氨酸蛋白酶抑制剂kazal1型(serine peptidase inhibitor Kazal type1,SPINK1)作为该家族中的一员,近年来受到了广泛的关注,它是一种由56个氨基酸残基组成的分泌性多肽,最主要的功能是抑制胰蛋白酶的活性。近年来的多项研究证实,与正常的肝脏组织相比,肝癌组织中SPINK1的基因表达显著上调,这可能是由于肿瘤浸润引起的组织破坏诱发急性期反应,在白细胞介素6(interleukin-6,IL-6)和白细胞介素1(interleukin-1,IL-1)的作用下诱导了SPINK1的高表达。SPINK1在肝细胞癌组织中的高表达显示了其具有作为肝细胞癌肿瘤标志物的潜能,然而其在外周血中的表达情况却并未被深入研究,尚不清楚其是否可作为肝细胞肝癌的血清肿瘤标志物。本实验设计应用酶联免疫吸附试验法(ELISA法)检测SPINK1、AFP在肝癌、肝硬化、健康人及胃癌和结肠癌患者血浆中的表达水平,探讨SPINK1在肝细胞肝癌诊断方面的应用价值。资料收集河南省人民医院2014年10月~2015年02月期间住院检查治疗的患者血样标本190例,详细记录患者的年龄、性别及肿瘤分期等临床资料。其中未经治疗的肝细胞癌患者70例、肝硬化患者30例、胃癌患者30例、结肠癌患者30例,肝癌、胃癌及结直肠癌患者的诊断均经过我院术后病理诊断证实,肝硬化患者经我院超声、CT及MRI诊断证实。另外从来我院体检的人群中随机挑选30例健康人作为健康对照组,全部排除肝、脑、心、肾等主要脏器疾病。方法1、标本采集收集每位受试者的清晨空腹静脉血3ml于edta-抗凝管内,并立即将标本在常温下以3000转/分离心15分钟,取上清液分装于1.5ml离心管内,然后放置在-100℃冰箱保存,待以后检测使用。2、检测方法血浆spink1、afp检测均采用elisa法。spink1试剂盒购买自台湾abnova公司,afp试剂盒购买自novateinbio公司。所有操作均按说明书严格执行。3、统计学方法采用spss21.0统计软件。计量资料采用“t”检验,多个样本均数比较采用方差分析。检验水准α=0.05,以α0.05为差异有统计学意义。绘制受试者工作曲线(roc),根据roc曲线分析血清spink1用于肝细胞癌诊断的敏感性、特异性。结果1、spink1在肝细胞癌组患者血浆中的表达显著高于肝硬化及健康对照组,差异有统计意义(p0.01)。2、根据肿瘤的tnm分期,iii-iv肝细胞癌患者血浆中spink1的表达量明显高于i-ii期肝细胞癌患者血浆中的表达量(p0.05)。3、本次实验中spink1、afp诊断肝细胞癌的敏感度分别为77.1%、51.4%。特异度分别为67.5%、96.7%。4、在35例afp阴性的肝细胞癌患者的血浆中,spink1表达阳性的患者有28例,阳性率80.00%。5、采用spink1、afp平行联合的检测方法,肝癌患者的敏感度和特异度分别达到65.8%和90%。采用系列联合的检测方法,肝癌患者的敏感度和特异度分别为98.3%和37.1%。结论1、血浆spink1具有作为肝细胞癌血清肿瘤标志物的潜能。2、血浆spink1表达量的高低与肝细胞癌患者的肿瘤分期明显相关。3、血浆spink1可用于afp阴性肝癌患者的筛查。4、通过spink1与afp的联合检测,可以明显提高肝癌患者的检出率。
【关键词】：肝细胞癌 SPINK1 甲胎蛋白 肿瘤标志物
【学位授予单位】：河南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 摘要4-7
• ABSTRACT7-11
• 主要英文缩略词对照表11-12
• 引言12-14
• 1 研究对象与主要仪器14-16
• 1.1 研究对象14
• 1.2 标本的采集与处理14
• 1.3 主要仪器设备14-16
• 2 实验方法16-20
• 2.1 血浆中SPINK1表达量的检测16-18
• 2.1.1 准备16
• 2.1.2 标准品的制备16-17
• 2.1.3 生物素标记的SPINK1抗体工作液的制备17
• 2.1.4 ABC（抗生物素蛋白-生物素-过氧化物酶复合物）工作液的制备17
• 2.1.5 操作步骤17-18
• 2.2 血浆中AFP表达量的检测18-19
• 2.2.1 准备18
• 2.2.2 加样18
• 2.2.3 温育18
• 2.2.4 配液18-19
• 2.2.5 洗涤19
• 2.2.6 加酶19
• 2.2.7 温育19
• 2.2.8 洗涤19
• 2.2.9 显色19
• 2.2.10 终止19
• 2.2.11 测定19
• 2.3 数据的处理及统计学分析19-20
• 3 结果20-26
• 3.1 SPINK1在各组样本血浆中表达情况的比较20
• 3.2 SPINK1与肝癌患者基本情况的相关性20-22
• 3.3 SPINK1用于诊断肝细胞癌的ROC曲线22
• 3.4 SPINK1在AFP阴性肝细胞癌患者血浆中的表达情况22-23
• 3.5 SPINK1和AFP联合检测在肝癌诊断上的价值23
• 3.6 SPINK1与胃癌患者基本情况的相关性23-26
• 4 讨论26-30
• 5 结论30-32
• 参考文献32-34
• 文献综述34-50
• 参考文献46-50
• 致谢50-51

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本文编号：991167