天然冰片通过氯通道介导促进鼻咽癌细胞摄取阿霉素的研究

发布时间：2017-10-08 13:10

  本文关键词：天然冰片通过氯通道介导促进鼻咽癌细胞摄取阿霉素的研究

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【摘要】：目的:我国传统中药冰片一直被用作辅助用药,能促进机体对其他有效药物的摄取,但机制不明确。我们前期研究发现氯通道开放可以促进细胞对药物的摄取,使用氯通道阻断剂及下调氯通道蛋白表达可以抑制该作用,说明氯通道可能参与或调节细胞对药物的摄取。本课题以低分化鼻咽癌细胞(CNE-2Z)为研究对象,以氯通道为研究出发点,探讨:1)氯通道在冰片促进阿霉素跨细胞膜转运中的作用。2)参与冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的氯通道分子本质。方法:本研究中使用的是天然冰片。1)用荧光示踪法检测冰片促进阿霉素跨细胞膜转运情况;2)采用全细胞膜片钳技术记录冰片激活的全细胞氯电流,并分析其电流特性及容积敏感性;3)用倒置荧光显微镜拍摄细胞图像,使用Q500MC图像分析软件计算并测量细胞容积变化;4)用酶标仪法及流式细胞术,检测冰片作用细胞前后细胞内药物浓度的变化及与氯通道关系;5)使用si RNA技术下调鼻咽癌细胞Cl C-3氯通道蛋白的表达,用Western Blot检测干扰前后细胞Cl C-3蛋白的表达水平;用流式细胞术及荧光显微示踪法检测si RNA对冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的影响;6)用MTT法检测冰片及冰片联合阿霉素的细胞毒作用。结果:1)冰片明显促进CNE-2Z细胞对阿霉素的摄取(增加约29%)。2)冰片能快速激活CNE-2Z细胞氯通道,产生氯电流,该电流能被氯通道阻断剂DIDS及Tamoxifen抑制。此电流也可以被47%高渗溶液抑制,说明冰片激活的氯电流具有容积敏感性。离子置换实验的结果表明,该氯通道的离子选择性为:I-Br-Cl-Gluconate-。3)细胞外灌流冰片溶液30分钟,CNE-2Z细胞体积明显缩小(减小约9%)。冰片此作用可被氯通道阻断剂DIDS阻断。4)冰片促进细胞对阿霉素摄取的效应可被氯通道阻断剂DIDS明显抑制。5)Cl C-3si RNA能显著下调CNE-2Z细胞Cl C-3氯通道蛋白表达(下调约57%);下调Cl C-3氯通道蛋白表达后,冰片促进CNE-2Z细胞对阿霉素摄取的作用减弱。6)冰片无明显的细胞毒作用,但可增强阿霉素对CNE-2Z细胞增殖的抑制作用,使其半抑制浓度(IC50)降低约50%。结论:1)冰片可以激活低分化鼻咽癌细胞的氯通道,促进细胞摄取阿霉素。2)氯通道是冰片促进阿霉素跨细胞膜转运的作用靶点之一。3)Cl C-3氯通道在冰片促进阿霉素跨细胞膜转运中起重要作用。4)冰片能明显加强阿霉素的抗肿瘤作用。
【关键词】：冰片 鼻咽肿瘤 膜片钳技术 氯通道 氯通道阻断剂
【学位授予单位】：暨南大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R73-36
【目录】：

• 中文摘要3-5
• Abstract5-8
• 1 前言8-14
• 1.1 冰片8-11
• 1.1.1 冰片的分类及作用8-9
• 1.1.2 冰片促进药物跨血脑屏障转运的研究9-10
• 1.1.3 冰片促进药物透皮吸收的研究10
• 1.1.4 冰片促进胃粘膜细胞对药物的摄取10
• 1.1.5 冰片促进细胞对药物的摄取10-11
• 1.2 氯离子通道11-12
• 1.2.1 氯离子通道的分类11
• 1.2.2 氯通道与物质转运11-12
• 1.3 本课题研究的目的及意义12-14
• 2 材料及方法14-26
• 2.1 材料14-17
• 2.1.1 主要仪器及设备14-15
• 2.1.2 细胞与药物15
• 2.1.3 主要试剂及药品15-17
• 2.2 方法17-25
• 2.2.1 细胞培养17-18
• 2.2.2 全细胞膜片钳技术记录CNE-2Z氯电流18-20
• 2.2.3 冰片对CNE-2Z细胞容积影响。20-21
• 2.2.4 荧光显微示踪法检测冰片促进细胞对阿霉素的摄取情况21-22
• 2.2.5 荧光酶标仪法检测冰片促进细胞对阿霉素的摄取情况22-23
• 2.2.6 流式细胞术检测细胞药物浓度23
• 2.2.7 Cl C-3 si RNA转染细胞23-24
• 2.2.8 MTT法检测冰片、阿霉素、及阿霉素联合冰片的细胞毒作用24-25
• 2.3 统计方法25-26
• 3.结果26-44
• 3.1 CNE-2Z 细胞对不同浓度阿霉素的摄取26-27
• 3.2 不同浓度冰片对 CNE-2Z 细胞对阿霉素吸收的影响27-28
• 3.3 冰片激活 CNE-2Z 细胞氯电流28-34
• 3.4 氯通道阻断剂抑制冰片对 CNE-2Z 细胞摄取阿霉素的促进效应34-36
• 3.5 下调 Cl C-3 氯通道表达可以抑制冰片对 CNE-2Z 细胞摄取阿霉素的促进效应36-43
• 3.6 冰片联合阿霉素增强阿霉素的细胞毒作用43-44
• 4.讨论44-46
• 4.1 冰片诱发 CNE-2Z 细胞容积缩小44
• 4.2 冰片可以促进 CNE-2Z 细胞对阿霉素的摄取44
• 4.3 冰片促进 CNE-2Z 细胞对阿霉素的摄取可能通过氯通道介导44-45
• 4.4 Cl C-3 氯通道在冰片促进 CNE-2Z 细胞对阿霉素的摄取中有重要作用45-46
• 4.5 冰片可以加强阿霉素诱导 CNE-2Z 细胞凋亡的作用46
• 5 结论46-47
• 参考文献47-51
• 发表论文51-52
• 主要缩略词汇表52-53
• 致谢53

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本文编号：994197