探讨中国汉族女性HMMR基因多态性与乳腺癌易感性的相关性研究

发布时间：2017-10-08 17:22

  本文关键词：探讨中国汉族女性HMMR基因多态性与乳腺癌易感性的相关性研究

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【摘要】：研究背景和目的：近年来,乳腺癌有发病率大幅度上升而平均发病年龄下降的趋势。乳腺癌不仅对患病的身体健康也对其心理也造成了极大的伤害,凭借其恶劣的社会学影响特征,乳腺癌成为了全世界肿瘤学关注的重点之一。虽然,现在乳腺癌的治疗除了传统的手术治疗、放化疗,又有靶向治疗的出现,但是,不管采取什么样的治疗,对患者及患者家庭造成的极大心理损伤及经济损失无法避免。因此,乳腺癌的早期诊断对患者尤为关键。乳腺癌的发生、发展是由环境、遗传、生活习惯等等因素作用下的一个复杂的病理生化过程,本实验即研究HMMR基因多态性与乳腺癌易感性的关系,希望从基因角度剖析乳腺癌的易感性规律。目前,全世界科学家公认雌激素受体、孕激素受体、c-erbB-2、Ki-67等的状态与乳腺癌的发生、发展、治疗效果及预后有着尤为密切的联系。乳腺癌在临床上有不同的临床表现,肿瘤的生长浸润特征也不尽相同,科学家们认为,导致这种差异主要是源于基因与分子水平的差异。雌激素受体(ER)、孕激素受体(PR)作为乳腺癌最重要的预后指标,它展望了经辅助、新辅助治疗及晚期乳腺癌治疗中激素治疗的疗效。科学家又依据这些指标,将乳腺癌分为4种分子亚型：管腔A型、管腔B型、ERBB2过表达型和基底细胞样亚型。最早的肿瘤分子分型的观点是由美国国立癌症研究所于1999年提出。此概念的提出对随后的乳腺癌指导治疗起到举足轻重的作用。管腔A型即免疫组织化学检测ER/PR阳性,ERBB2阴性,Ki67低表达。此类型为乳腺癌中发病率最高、预后最好的亚型。由于激素受体为阳性,故对内分泌治疗敏感,而不适合于靶向治疗。临床上常见于早期患者,且治疗效果较好。HER-2过表达型,即免疫组织化学检测ER、PR阴性,ERBB2阳性,Ki-67多为高表达。在原发性乳腺癌患者中,有20%-30%的患者存在HER-2过表达。该型的特点为ERBB2基因扩增,17号染色体上的RAD5、RRM2等基因表达下调,而GRB7、TRAP100等基因的表达上调。因为ER、PR均为阴性,所以对内分泌治疗几乎无效。在术后辅助化疗中,该型对含蒽环类的化疗方案较为敏感,而且具有一定的量效关系。HER-2既是靶向药物的预测指标,又是一项预后指标。管腔B型即免疫组织化学检测ER阳性或PR阳性,而HER-2也阳性,多见于高龄的乳腺癌患者。且对他莫昔芬的疗效相对管腔A型差,对芳香化酶抑制剂的效果却较好。Basal-like型是免疫组化ER, PR、HER-2均为阴性的乳腺癌。RHAMM(透明质酸介导的细胞游走受体),在细胞表面又称为CD168。编码该蛋白的基因目前研究证实在人类及鼠类中存在。在人类中我们称之为HMMR基因,而在鼠类中我们称之为Hmm基因。HMMR基因定位于人第5号染色体5q33.2-qter,基因组跨度31669bp,含有14个外显子,cDNA全长2672bp,有一个2175bp的读码框架,编码725个氨基酸的蛋白,分子量84Ku。鼠RHAMM基因定位于第11号染色体q臂,距着丝点19cM(CentiMorgan,厘摩),cDNA全长3539bp。RHAMM既以膜型存在,又以胞内型存在。研究显示,其产物RHAMM蛋白可作为H-ras通路下游的调节因子参与细胞信号的无序传导和恶性转化。RHAMM被证实是多面性分子：首先RHAMM具有促进肿瘤的作用,其产物己被证实为促癌物,且可能成为肿瘤细胞移动的促进因素,其表达促进了肿瘤的发生和发展,且与肿瘤的病理分期相关。其产物与肿瘤分级、浸润程度呈一定的正相关关系；RHAMM也参与抗肿瘤的作用：人工合成的RHAMM蛋白在细胞体外培养中可以抑制细胞的增殖和细胞克隆的形成,。其具体参数尚不明确,有待更多的实验研究。全基因组关联研究(GWAS)提供了对于适度关联进行一个可理解、无偏倚的研究的潜在可能。至2005年末,在基因组序列的30亿个碱基对中,每1250个碱基间的平均距离提供了一个常见的单核苷酸多态性(SNP),定义为较少等位基因频率的单核苷酸多态性,较少等位基因频率(MAF)5%数据库。分析显示,超过90%的将近1000万个估计存在的常见单核苷酸多态性中至少有一个与其他的单核苷酸多态性高度相关：称为连锁不平衡现象。理论上说,应该对有足够数目病例和对照的50万-60万个单核苷酸多态性位点评估,应该对特殊癌症易感性和相关数量症状进行全基因组研究。研究方法：1.选取样本。所有样本选自南方医科大学生物抗体研究所组织样本库,均为2010年10月至2013年11月期间首次确诊为浸润性乳腺癌的女性患者。所有患者均为汉族。确保所有患者无关联性且无乳腺癌家族史及乳腺疾病史。所有样本均统一由2名以上有经验的病理学专家经HE染色后确诊为浸润性乳腺癌。本研究中统计了所有患者的姓名、年龄、肿瘤分级分型、免疫组化等详细信息。2.选取SNPs位点。参考GWAS (Genome-wide association study),即全基因组关联分析,从HMMR基因上选取16个可能与乳腺癌相关的SNP位点,即rs213505,rs299290,rs299318,rs427056,rs2069345,rs2069347,rs2303077, rs4869089,rs6556674,rs10035535,rs1006017,rs13183712,rs17535909, rs17601374,rs74805168, rs193028482。3.行引物设计后进行PCR、SAP、IPLEX及脱脂点样等步骤行]HMMR基因多态性的检测。所有的操作过程严格参照MassARRAY(?)-IPLEX检测平台的操作说明由两名技术人员(包括作者)共同完成。参照仪器说明,由2名以上技术人员通过自动和人工两种方式进行多态性图像的分析,由作者进行结果的统计。4.首先对病例组和对照组基因型分布频率进行Hardy-Weinberg平衡检验,其次,采用统计分析的方法计算位点与乳腺癌,分析位点的多态性与乳腺癌发生趋势的关系。在此基础上,再分层分析位点多态性分别与雌激素受体状态、孕激素受体状态的关系。最后分析这些位点的多态性是否因乳腺癌分子分型的差异而有规律性的关联。基因的遗传有显性、共显性、隐性、超显性四种,那么,本实验中也详尽分开为4个模型,进行了统计分析。本实验使用了SNP分析软件(http://bioinfo.iconcologia.net/SNPStats)的进行了更为简单快捷的分析。此外,使用SPSS18.0软件进行了x2检验和非条件Logistic回归。实验结果：1.对本研究中所有患者的乳腺癌特征信息进行统计：最常见的病理类型为乳腺浸润性导管癌,占所有病例的92.36%。根据ER、PR状态进行分类,其中ER阳性患者占60.5%,PR阳性患者占57.1%。本研究中的管腔A型(ER和/或PR+, Her-2-)乳腺癌患者占了半数以上。本研究中确保所有的病例均关联无乳腺疾病史及乳腺癌家族史,但是,本研究中仍然有9.3%的患者有其他恶性肿瘤的家族史。2.对所有研究的SNP位点进行病例组和对照组的Hardy-Weinberg平衡检验,共有7个SNP位点通过了Hardy-Weinberg平衡检验(P0.05),即rs299318, rs4869089,rs6556674,rs13183712,rs17601374,rs74805168,rs193028482。然而,进一步分析发现rs193028482在我们研究的群体中是非多态性的,所以排除在我们的研究之外。3.位点rs13183712在人群中存在GG、GT、TT三种基因型,这三种基因型在乳腺癌组中的分布频率为57.3%GG,37.6%GT和5.1%TT,而在对照组中的频率为47.5%GG,45%GT和7.4%TT，基因型分布在两者中存在明显的差异(P=0.012)。进一步分析OR值与可信区间CI发现,共显性模型codominant (OR=0.69,95%CI=0.52-0.91,p=0.013),超显性模型overdominant (OR=0.74, 95%CI=0.56-0.96, p=0.026)。所以,rs13183712位点的GT基因型是降低了乳腺癌发生的风险的。4.根据雌激素受体ER(+/-)分组进行分层分析,rs13183712位点的显性模型中,G/T-T/T基因型与雌激素受体ER有显著性关联,见表3-3-1。其中,ER阴性状态时(OR=0.66,95%CI=0.46-0.95,P=0.024)。而ER阳性状态时(OR=0.68,95%CI=0.50-0.94,P=0.018)。rs17601374位点的共显性与显性模型中,AT基因型与ER阴性乳腺癌呈负相关,共显性模型(OR=0.62,95%CI=0.37-1.06,P=0.036)。5.进一步研究孕激素受体PR与本研究中位点多态性的关联发现,rs4869089位点AA基因型倾向于发生PR阴性乳腺癌,隐性模型(OR=1.99,95%CI=1.08-3.67,P=0.03)。rs13183712位点GT基因型与PR阳性乳腺癌呈负相关,共显性模型(OR=0.68,95%CI=0.48-0.95,P=0.04);而在显性模型中,无论PR的状态,G/T-T/T基因型均降低乳腺癌发生风险。在rs17601374位点AT基因型降低PR阴性乳腺癌发生风险,共显性模型(OR=0.62,95%CI=0.37-1.04,P=0.027),6.乳腺癌的分子分型为本研究的重点,我们进一步分析了各位点的多态性与乳腺癌分子分型的关系。研究发现rs4869089,rs17601374,rs13183712与管腔B型乳腺癌相关。rs4869089位点AA基因型倾向于管腔B型乳腺癌,隐性模型(OR=2.23,95%CI=1.17-4.25,P=0.019)。rs17601374位点AT基因型降低管腔B型乳腺癌发生风险,共显性模型(OR=0.5,95%CI=0.27-0.92,P=0.015),超显性模型(OR=0.51,95%CI=0.27-0.94,p=0.021)。rs13183712中的GT基因型降低管腔B型、HER2+型乳腺癌发生风险,在共显性(OR=0.57,95%CI=0.38-0.86,p=0.011)、及超显性模型(OR=0.62,95%CI=0.41-0.92,p=0.017)。对于rs74805168的CT基因型,超显性(OR=0.24,95%CI=0.06-1.02,P=0.017),降低基底亚型乳腺癌的发生风险。结论：1) HMMR基因的位点rs13183712多态性对乳腺癌的发生有保护作用。2) HMMR基因上的4个多态性位点：rs4869089,rs13183712,rs17601374和rs74805168与乳腺癌ER、PR状态或分子分型有不同的相关性,具体见结果部分。3)单核苷酸多态性的研究是人类基因组计划很重要的一部分,目的发现更多与乳腺癌有关联的易感基因,以进一步探究其发病机制和更好地进行该疾病的基因诊断治疗。
【关键词】：HMMR 乳腺癌 SNP 易感性
【学位授予单位】：南方医科大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R737.9
【目录】：

• 摘要3-9
• ABSTRACT9-18
• 第一章 前言18-30
• 第二章 实验材料和实验方法30-45
• 2.1 实验材料30-32
• 2.2 实验方法和步骤32-45
• 第三章 结果45-55
• 讨论55-60
• 结论60-61
• 参考文献61-68
• 硕士论文发表情况68-69
• 致谢69-71

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 邱增华;;雌激素受体与乳腺癌的关系[J];山东医药;2009年41期

2 南昊成;吴立刚;刘奇伦;;乳腺癌分子标志及分子分型研究进展[J];现代肿瘤医学;2013年09期

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本文编号：995330