三氧化二砷和硼替佐米提高多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞对NK和γδT细胞杀伤敏感性的机制研究

发布时间：2017-10-08 16:13

  本文关键词：三氧化二砷和硼替佐米提高多发性骨髓瘤RPMI-8226细胞对NK和γδT细胞杀伤敏感性的机制研究

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【摘要】：目的：多发性骨髓瘤（multiple myeloma，MM）是临床常见血液系统恶性肿瘤，占恶性肿瘤死亡的2%。虽然大剂量化疗和造血干细胞移植明显降低了MM的死亡率，但对于复发难治性MM患者的治疗仍较困难。因此，亟待寻找能够提高MM治疗效果的新方法。近年来，肿瘤免疫治疗因其治疗效果显著，越来越受到人们的关注。肿瘤过继免疫细胞治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）技术是近年来发展尤为迅速的肿瘤免疫治疗手段，已经在许多肿瘤的治疗中呈现出明显的治疗效果。ACI与MM的常规治疗手段相结合，能够提高MM的治愈效果，是值得研究的课题。本实验选用三氧化二砷（arsenic trioxide，ATO）和硼替佐米（bortezomib，Bor）两种MM临床常用化疗药物，探讨低剂量药物作用于MM细胞系RPMI-8226细胞后能否增强细胞免疫原性，同时观察药物处理后的MM细胞对NK细胞和γ T细胞杀伤敏感性的变化，并探讨其可能的机制，为MM的临床治疗提供新思路。 方法：取10例MM患者外周血，分离单个核细胞并加入相应细胞因子，向NK和γ T细胞诱导；流式细胞术检测NK细胞表面标志CD3、CD56、NKG2D和DNAM-1，γ T细胞表面标志CD3、Vγ9、NKG2D和DNAM-1表达情况；MTT法检测ATO与Bor对RPMI-8226、NK和γ T细胞增殖的抑制作用；流式细胞术检测RPMI-8226细胞经ATO或Bor预处理前后细胞表面MICA、MICB和CD155的变化；钙黄绿素释放法检测NK和γ T细胞对ATO或Bor预处理的RPMI-8226细胞的杀伤作用。 结果：1.10例MM患者外周血单个核细胞经相应细胞因子刺激扩增后，诱导出大量NK（CD3-CD56+）和γ T（CD3+Vγ9+）细胞，纯度分别为（85.76±6.28）%和（92.30±3.47）%。2. ATO与Bor对RPMI-8226细胞的增殖具有抑制作用，且呈剂量依赖性。3.低剂量ATO能够提高RPMI-8226细胞表面NKG2D配体MICA和MICB的表达，且呈时间依赖性；Bor对RPMI-8226细胞表面NKG2D配体MICA和MICB的表达呈现短暂促进作用，8h出现峰值。ATO和Bor均能够提高RPMI-8226细胞表面DNAM-1配体CD155的表达。4.低剂量ATO与Bor在体外对NK和γ T细胞的增殖均具有抑制作用。且ATO对γ T细胞的抑制作用强于对RPMI-8226细胞的作用。5. NK和γ T细胞对经低剂量ATO或Bor预处理的RPMI-8226细胞的杀伤作用，要明显强于未经预处理的RPMI-8226细胞。6.单独封闭NK细胞表面受体NKG2D，其对药物预处理组和未经药物处理组的的杀伤作用明显降低，但是药物预处理组仍然高于未经药物处理组；单独封闭NK细胞表面受体DNAM-1或共同封闭DNAM-1和NKG2D后，其对药物预处理组和未经药物处理组的杀伤作用明显降低，两组之间无差异。7.单独或共封闭γ T细胞表面受体NKG2D和DNAM-1后，其对药物预处理组和未经药物处理组的杀伤作用明显降低，但是药物预处理组仍然高于未经药物未处理组。 结论：1.本实验成功培养扩增出纯度较高的NK和γ T细胞，其对RPMI-8226细胞具有明显杀伤作用。2. ATO或Bor对NK、γ T和RPMI-8226细胞的增殖均具有抑制作用，ATO对γ T细胞的增殖抑制作用最强，其次分别是RPMI-8226细胞和NK细胞。而Bor对RPMI-8226细胞的增殖抑制作用最强。3.低剂量ATO或Bor预处理RPMI-8226细胞后，可增强靶细胞对NK效应细胞的杀伤敏感性，其机制与药物提高靶细胞表面受体MICA、MICB和CD155有关，，推测其依赖于DNAM-1和NKG2D途径，且主要依赖DNAM-1途径。4.低剂量ATO或Bor预处理RPMI-8226细胞后，可增强靶细胞对γ T效应细胞的杀伤敏感性，其机制与药物提高靶细胞表面受体MICA、MICB和CD155有关，推测其依赖于DNAM-1和NKG2D途径，可能还存在其它的途径。
【关键词】：多发性骨髓瘤 三氧化二砷 硼替佐米 NK细胞 γδT细胞 杀伤敏感性
【学位授予单位】：吉林大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2015
【分类号】：R733.3
【目录】：

• 中文摘要4-6
• Abstract6-11
• 英文缩略词11-12
• 第1章 绪论12-14
• 第2章 综述14-25
• 2.1 MM 及其治疗现状14-15
• 2.2 ATO 抗肿瘤机制15-18
• 2.3 Bor 抗肿瘤机制18-21
• 2.4 ACI 技术21-24
• 2.5 展望24-25
• 第3章 材料与方法25-33
• 3.1 实验材料25-27
• 3.2 实验方法27-32
• 3.3 统计学分析32-33
• 第4章 结果33-45
• 4.1 NK 细胞表面免疫表型及活化分子的鉴定33
• 4.2 γδT 细胞表面免疫表型及活化分子的鉴定33-34
• 4.3 ATO 或 Bor 对 RPMI-8226 细胞增殖的影响34-35
• 4.4 ATO 或 Bor 对 RPMI-8226 细胞表面 MICA 和 MICB 表达的影响35-36
• 4.5 ATO 或 Bor 对 NK 和γδT 细胞增殖的影响36-37
• 4.6 ATO 或 Bor 对 NK 细胞杀伤 RPMI-8226 细胞的影响37-38
• 4.7 ATO 或 Bor 对γδT 细胞杀伤 RPMI-8226 细胞的影响38-39
• 4.8 ATO 或 Bor 对 RPMI-8226 细胞表面 NKG2D 和 DNAM-1 配体表达的影响39-41
• 4.9 经抗体封闭后 NK 细胞对 RPMI-8226 细胞的杀伤作用41-43
• 4.10 经抗体封闭后的γδT 细胞对杀伤 RPMI-8226 细胞的杀伤作用43-45
• 第5章 讨论45-49
• 第6章 结论49-50
• 参考文献50-56
• 作者简介56-57
• 致谢57

【共引文献】

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本文编号：995003