过表达AMACR促进肝癌细胞增殖及作用机制研究

发布时间：2017-10-09 09:22

  本文关键词：过表达AMACR促进肝癌细胞增殖及作用机制研究

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【摘要】：目的:AMACR是一种胞浆蛋白,主要存在于人类过氧化物酶体和线粒体中,参与侧链脂肪酸及脂肪酸衍生物的β氧化和在胆酸代谢中间产物的氧化过程中发挥重要作用,它的高表达对肿瘤的增殖具有积极的促进作用,但这一结论在肝癌中尚未被证实。本课题组将采用无标记定量蛋白质组学技术分析过表达AMACR对肝癌细胞增殖的作用机制。方法:应用AMACR过表达的慢病毒载体对肝癌细胞株HepG2进行转导,建立AMACR稳定过表达细胞株,通过CCK-8试验检测过表达AMACR对肝癌细胞增殖的影响。然后提取AMACR过表达细胞株全蛋白,进行无标记定量蛋白质组学研究。对鉴定结果用统计学方法筛选出差异表达蛋白,并对其进行生物信息学分析和利用荧光定量PCR方法对结果进行验证。结果:成功构建了AMACR过表达肝癌细胞株,CCK-8试验结果显示过表达AMACR能够促进肝癌细胞的增殖。应用无标记定量蛋白质组学方法,共筛选出138个差异表达蛋白,其中上调蛋白124个,下调蛋白14个。这些差异表达蛋白主要参与代谢加工、细胞加工等,证明AMCR的过表达对于肝癌细胞的生物学行为影响巨大。IPA分析发现,这些差异蛋白主要参与了ERK1/2信号通路和NF-κB信号通路。应用qRT-PCR方法对AMACR和FABP5的表达量进行验证,结果与质谱定量结果相符。结论:过表达AMACR能够促进人类肝癌细胞的增殖,可能是通过调节ERK1/2和NF-κB信号通路以及上调多个促癌因子的表达量的手段使肝癌细胞的增殖能力增强。
【关键词】：肝细胞癌 α-甲酰基辅酶A消旋酶 细胞增殖 无标记定量蛋白质组学
【学位授予单位】：蚌埠医学院
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R735.7
【目录】：

• 中文摘要5-6
• Abstract6-8
• 前言8-11
• 材料与方法11-24
• 1. 主要仪器11
• 2. 实验材料11-13
• 3. 主要试剂配制方法13-14
• 4.实验方法14-24
• 结果24-32
• 1. 稳定过表达AMACR肝癌细胞株的建立24
• 2. CCK-8 细胞增殖试验24-25
• 3. 蛋白样品浓度测定和样品质量检测25-26
• 4. 蛋白鉴定及差异蛋白的筛选26-30
• 5. 差异蛋白的生物信息学分析30-31
• 6. AMACR的过表达和差异蛋白质的荧光定量RT-PCR验证31-32
• 讨论32-35
• 结论35-36
• 参考文献36-39
• 致谢39-40
• 附录A 主要英文缩略词表40-41
• 附录B 综述 基于蛋白质组学的肝癌生物标志物研究41-45
• 参考文献44-45

【参考文献】

中国期刊全文数据库 前2条

1 周玲丽;曹骥;李薇;罗旺;杨香娣;杨春;骆成飘;唐艳萍;李瑗;;沉默FABP-5基因对人肝癌HepG2细胞的影响[J];世界华人消化杂志;2015年02期

2 ;Cancer Incidence and Mortality in China,2007[J];Chinese Journal of Cancer Research;2012年01期

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本文编号：999392