芪苈强心胶囊对IMCD3细胞AQP2表达的影响及其机制研究

发布时间：2017-11-17 06:13

  本文关键词：芪苈强心胶囊对IMCD3细胞AQP2表达的影响及其机制研究

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【摘要】：研究背景慢性心力衰竭(简称慢性心衰)属于严重威胁人类健康的心血管疾病,水液潴留是慢性心力衰竭最主要的病理改变之一,是导致心源性水肿的直接原因,可进一步加重心脏功能的受损程度。水通道蛋白-2(AQP2)主要存在于肾脏集合管,在水液代谢和电解质平衡方面起到重要的调节作用。AQP2的异常增多是导致水液潴留,从而造成慢性心力衰竭预后不佳的一个重要原因。因此,AQP2作为一种治疗水液失衡的新兴靶点受到广泛关注,成为治疗心源性水肿的重要切入点。我们前期实验研究发现芪苈强心胶囊可通过抑制AQP2的表达,减少肾集合管对水的重吸收,从而改善慢性心衰大鼠的水潴留现象。此次试验进一步研究芪苈强心胶囊对dDAVP诱导的IMCD3细胞内AQP2表达的影响极其机制。目的探讨芪苈强心胶囊对AQP2表达的影响及其表达机制,为临床治疗慢性心衰提供一定的实验依据。方法1.体外培养传代细胞株IMCD3,通过CCK8试剂盒检测细胞增殖活性,对dDAVP浓度进行筛选,再通过Western blot检测dDAVP诱导AQP2的相对表达量,进行dDAVP二次筛选,选出最佳浓度用于后续实验。2.将芪苈强心胶囊溶于完全培养基(DMEM+10%FBS),配制不同浓度芪苈强心胶囊溶液,500ug/ml,750ug/ml, 1000ug/ml,1500ug/ml。通过CCK8试剂盒检测,筛选出对细胞增殖活性无明显影响的药物浓度用于后续实验。通过Western blot实验,研究不同浓度的芪苈强心胶囊对dDAVP诱导IMCD3细胞表达AQP2蛋白的影响。3.(1)设置对照组(空白)、模型组(dDAVP)、加药组(低、中、高剂量的芪苈强心胶囊),培育24h后,ELISA检测cAMP水平,Western blot检测p-ERK1/2和Epac1。(2)设置对照组1(空白)、模型组1(dDAVP)、对照组2(8-CPT)、模型组2(dDAVP+8-CPT)、加药组(dDAVP+8-CPT+低、中、高剂量的芪苈强心胶囊),培育24h后,Westernblot实验检测AQP2, p-ERK。结果1.各浓度梯度dDAVP对IMCD3细胞增殖活性的影响并无统计学差异(P0.05)。2.加药组的dDAVP浓度为10-7M,10-8M, 10-9M,10-10M时,与对照组相比,AQP2的表达显著增高(P0.05),且在10-9M的情况下AQP2相对表达最显著,可用于后续实验,建立模型组。3.芪苈强心胶囊在浓度为50Oug/ml,750ug/ml,1000ug/ml时对细胞增殖的影响无统计学意义(P0.05),1500ug/ml的药物浓度对细胞增殖有明显抑制作用,具有统计学意义(P0.05)。4.结果显示低、中、高剂量组中药均对dDAVP诱导的IMCD3细胞内AQP2蛋白的表达有抑制作用(P0.05)。芪苈强心胶囊浓度越高对IMCD3细胞AQP2表达的抑制作用越明显。5.与对照组相比,dDAVP可明显提高IMCD3细胞内cAMP的水平(P0.05),且芪苈强心胶囊溶液可有效降低cAMP水平(P0.05)。6.dDAVP可明显上调Epac1和p-ERK1/2的表达(P0.05)芪苈强心胶囊浓度为750ug/ml、1000ug/ml时,对Epacl表达有显著的下调作用(P0.05)；在不同浓度的芪苈强心胶囊溶液作用下,p-ERK1/2的表达均明显减少(P0.05)。7.加入激动剂β-pCPT-2'-O-Me-cAMP后,无论是对照组还是模型组,其p-ERK1/2和p-AQP2的蛋白表达量明显增加,具有统计学意义(P0.05)；芪苈强心胶囊对p-ERK1/2和p-AQP2的蛋白表达量有明显下调作用(P0.05)。结论1.dDAVP可诱导IMCD3细胞的AQP2表达增高。2.芪苈强心胶囊可有效抑制在dDAVP诱导下高表达的AQP2。3.芪苈强心胶囊可通过cAMP/Epac/ERK1/2信号通路对AQP2的表达进行有效调控。
【学位授予单位】：北京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259

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本文编号：1195062