龟鹿二仙胶对成骨细胞Ⅰ型胶原基因表达的实验研究

发布时间：2017-12-29 04:11

  本文关键词：龟鹿二仙胶对成骨细胞Ⅰ型胶原基因表达的实验研究　出处：《南京中医药大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

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【摘要】：背景：研究表明Ⅰ型胶原与骨质疏松症(Osteoporosis, OP)有着密切联系。Ⅰ型胶原由Colla1及Colla2基因编码,可受转化生长因子β(transforminggrowthfactor-β,TGF-β)调控。TGF-β1、 TGF-β2是TGF-βs的两个异构体。中药龟鹿二仙胶可以治疗骨质疏松症,以往研究多以临床疗效观察为主,与Ⅰ型胶原有关的研究较少。目的：研究龟鹿二仙胶对成骨细胞Ⅰ型胶原基因表达的影响,探索龟鹿二仙胶治疗OP的机制。方法：取SD大鼠100只,随机分为空白组、龟鹿二仙胶组(低剂量)、龟鹿二仙胶组(中剂量)、龟鹿二仙胶组(高剂量)、骨化三醇组。每天灌胃1次,持续7d,末次给药2h后腹主动脉采血制成含药血清条件培养基培养成骨细胞。通过MTT法及活细胞形态观察来了解含药血清对成骨细胞增殖及凋亡的影响。应用Western Blot法检测各组成骨细胞Ⅰ型胶原及TGF-β蛋白表达水平。运用PCR (RT-PCR)技术检测各组成骨细胞Ⅰ型胶原及TGF-β的mRNA表达。结果：(1)MTT结果显示：龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无明显增殖。骨化三醇组的成骨细胞有明显增殖(P0.05)。细胞活细胞染色提示：骨化三醇组及龟鹿二仙胶各组的成骨细胞无显著的凋亡。(2) RT-PCR法结果显示：骨化三醇组与龟鹿二仙胶各组Colla1及Colla2mRNA的水平均有增加(P0.01)；龟鹿二仙胶中、高剂量组Colla1及Colla2mRNA水平增加较明显(P0.05),龟鹿二仙胶高剂量组较中剂量组Colla1及Colla2mRNA水平增加不明显(P0.05)；骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2 mRNA水平无明显变化(p0.05)；龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2 mRNA水平均有增加(P0.01)；且龟鹿二仙胶中、高剂量组TGF-β1、TGF-β2 mRNA水平增加一致,比较差异无统计学意义(P0.05)。(3) Western blot结果提示：第24小时,龟鹿二仙胶高剂量组能使成骨细胞Colla1及Colla2蛋白合成增加(P0.05)。第48小时,骨化三醇组、龟鹿二仙胶各组均能使成骨细Colla1及Colla2蛋白合成增加(P0.01)；龟鹿二仙胶高、中剂量组之间比较差异没有统计学意义(P0.05)；第24、48小时,骨化三醇组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P0.05)；在24小时,龟鹿二仙胶高剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成有显著增强(P0.01),龟鹿二仙胶低、中剂量组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成无明显变化(P0.05)；48小时,龟鹿二仙胶各组TGF-β1及TGF-β2蛋白合成增加(P0.01)。龟鹿二仙胶高、中剂量组之间无显著区别(P0.05)。结论：龟鹿二仙胶可以促进Ⅰ型胶原基因的表达,其机制可能与调节细胞因子TGF-β有关。
[Abstract]:......
【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R259

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本文编号：1348733