肠道菌作用下小檗碱体内药代动力学及头花蓼活性成分代谢特征研究

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学校代码：１００２３

学号：￥２０１２００８０５５

硕士学位论文

肠道菌作用下小檗碱体内药代动力学及头花蓼活性

成分代谢特征研究

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所

姓院名：北京协和医学院药物研究所何驰宇

王琰研究员

王琰研究员

陈扬超教授

贺文义副主任技师：指导教师：导师小组：

学科专业：

研究方向：

完成日期：药学药物分析及药物代谢２０１５年５月

ＧｒａｄｕａｔｉｏｎＴｈｅｓｉｓｏｆＭ．Ｓ．Ｄｅｇｒｅｅ

ＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅ

目录ＩＵｌｌｌＵｌｌＩＩＩｌＵＩＵｌ

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摘要………………………………………………………………………………………………………………８

绪论…………………………………………………………………………１３第一章

１．哺乳动物肠道菌群研究进展……………………………………………………．１３１．１哺乳动物肠道菌群与疾病……………………………………………………．１４

１．１．１肠道菌群与肥胖……………………………………………………………１４１．１．２肠道菌群与代谢综合征……………………………………………………１５

１．１．３肠道菌群与肿瘤……………………………………………………………１５

１．２肠道菌群引起的药物代谢及生物学效应……………………………………１６１．３肠道菌群代谢药物及药效相关性的研究方法………………………………１７１．３．１肠道菌群作用下药物体外代谢的研究方法……………………………．．１７

１．３．１．１肠道内容物或粪便温孵法［３０】【３１】【３２】…………………………………一１７

１．３．１．２粪便中微生物粗酶与药物共温孵法【３３Ｊ………………………………１７

１．３．１．３单一的菌株与药物温孵培养法［３３】【３４】…………………………………１７

１－３．２肠道菌群作用下药物体内代谢的研究方法……………………………．．１７

１．３．２．１不同给药方式的比较…………………………………………………１７

１．３．２．１采用无菌模型或伪无菌模型研究药物经肠道菌群的代谢…………１８

１．４肠道菌群作用下天然产物代谢的研究进展…………………………………．１８１．４．１黄酮类化合物肠道菌群的代谢……………………………………………１８

１．４．２萜类化合物肠道菌群的代谢………………………………………………１９１．４．３皂苷类化合物肠道菌群的代谢……………………………………………１９１．４．４生物碱类化合物肠道菌群的代谢…………………………………………２０

１．４．５苯丙素类化合物肠道菌群的代谢…………………………………………２０

１．４．６蒽醌类化合物肠道菌群的代谢……………………………………………２１

１．４．７其它类化合物肠道菌群的代谢……………………………………………２１

１．５小结……………………………………………………………………………．２１２．小檗碱体内药代动力学与药效学关联性的研究进展…………………………一２２

２．１小檗碱的药理作用……………………………………………………………２３２．１．１降血脂作用………………………………………………………………一２３２．１．２降血糖作用………………………………………………………………一２４２．１．３抗肿瘤作用………………………………………………………………一２４

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ＭｅｄｉｃａｌＣｏｌｌｅｇｅＣｈｉｎｅｓｅＡｃａｄｅｍｙｏｆＭｅｄｉｃａｌＳｃｉｅｎｃｅｓ＆ＰｅｋｉｎｇＵｎｉｏｎ

２．１．４抗病原微生物作用………………………………………………………一２４

２．１．５保护心血管的作用………………………………………………………．．２５

２．２小檗碱体内药代动力学的研究进展…………………………………………２５

２．２．１吸收………………………………………………………………………一２５

２．２．２分布………………………………………………………………………一２６

２．２．３代谢………………………………………………………………………一２６

２．２．４排泄………………………………………………………………………一２７

２．３小结……………………………………………………………………………２７３．头花蓼的研究进展………………………………………………………………一２８

３．１头花蓼的化学成分研究………………………………………………………２９３．２头花蓼的药理作用研究………………………………………………………３０

３．２．１抗氧化作用………………………………………………………………．．３０

３．２．２抗菌作用…………………………………………………………………一３１

３．２．３抗炎作用…………………………………………………………………．．３１

３．２．４镇痛作用…………………………………………………………………一３１

２．２．５抗癌作用…………………………………………………………………．．３１

３．２．６临床应用研究……………………………………………………………一３２

３．３头花蓼有效成分代谢转化及药代动力学研究………………………………３２

３．３．１鞣花鞣质成分ＦＲ４２９的代谢转化及药代动力学研究…………………．３３

３．３．２有效成分槲皮苷的代谢转化及药代动力学研究…………………………３５

３．３．３有效成分没食子酸的代谢转化及药代动力学研究………………………３５

３．４小结………………………………………………………………………………………………………３５４．立题背景及意义…………………………………………………………………３６５．目标与策略………………………………………………………………………３６

第二章ＳＩ）大鼠伪无菌模型的建立………………………………………………。３８

１．实验材料…………………………………………………………………………３８

１．１药品与材料……………………………………………………………………３８１．２实验仪器与设备………………………………………………………………３８１．３实验动物………………………………………………………………………．３８２．实验方法…………………………………………………………………………一３８

２．１口服抗生素建立ＳＤ大鼠伪无菌动物模型…………………………………一３８２．２肠道菌群制备和培养…………………………………………………………．３９２．２．１肠道内容物的称重…………………………………………………………３９

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２．２．２肠道菌液的稀释……………………………………………………………３９

２．２．３营养琼脂培养基的制备……………………………………………………３９

２．２．４肠道菌液的点样……………………………………………………………３９

２．２．５肠道菌的孵育与培养……………………………………………………一３９

２．３肠道菌群种类的鉴定…………………………………………………………．４０２．４肠道菌落的计数………………………………………………………………．４０３．实验结果…………………………………………………………………………一４０

第三章肠道菌群作用下小檗碱体内药代动力学研究……………………………４３

１．实验材料…………………………………………………………………………４３

１．１药品与试剂……………………………………………………………………４３１．２实验仪器与设备………………………………………………………………４３１．３实验动物………………………………………………………………………４３２．实验方法…………………………………………………………………………４３

２．１血浆样品的前处理……………………………………………………………４３２．２粪便样品的前处理……………………………………………………………．４４２．３小檗碱及内标物质标准溶液的配制…………………………………………．４４２．４ＬＣ／ＭＳ／ＭＳ的分析方法………………………………………………………．４４

２．４．１液相色谱条件………………………………………………………………４４

２．４．２质谱条件……………………………………………………………………４４

２．５小檗碱肠道菌代谢产物二氢小檗碱ＧＣ／ＭＳ的分析方法…………………一４５

２．５．１气相色谱条件………………………………………………………………４５

２．５．２质谱条件……………………………………………………………………４５

２．６ＳＤ大鼠伪无菌动物模型的建立………………………………………………４５２．７小檗碱在正常ＳＤ大鼠、伪无菌ＳＤ大鼠体内血浆药代动力学研究………４５２．８小檗碱在正常ＳＤ大鼠、伪无菌ＳＤ大鼠体内排泄动力学研究……………４５２．９数据统计与分析………………………………………………………………．４６３．实验结果…………………………………………………………………………４６

３．１小檗碱ＬＣ．ＭＳ／ＭＳ检测结果及二氢小檗碱ＧＣ／ＭＳ检测结果的分析……．４６３．２小檗碱在正常ＳＤ大鼠、伪无菌ＳＤ大鼠体内血浆药代动力学研究结果．．４７３．３小檗碱在正常ＳＤ大鼠、伪无菌ＳＤ大鼠体内排泄动力学研究……………５０４．小结…………………………………………………………………………………………………………５２

第四章肠道菌群对小檗碱降糖降脂治疗作用的研究……………………………５３

１．实验材料…………………………………………………………………………５３４

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１．１药品与试剂……………………………………………………………………５３１．２实验仪器与设备………………………………………………………………５３１．３实验动物………………………………………………………………………５３２．实验方法…………………………………………………………………………５３

２．１

２．２

２．３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠伪无菌动物模型的建立及分组…………………………．５３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠的菌落数检测……………………………………………．５４ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗碱治疗１４天血药浓度检测……………………５４２．４血糖血脂检测…………………………………………………………………．５４

２．４．１空腹血糖（ＦＢＧ）的测定…………………………………………………５４

２．４．２总胆固醇（ＣＨＯ）的测定………………………………………………一５４

２．４．３甘油三酯（ＴＧ）的测定…………………………………………………．５５

３．实验结果…………………………………………………………………………５５

３．１ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠ＩＳｌ服小檗碱治疗１４天菌落数检测结果…………………５５３．２ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗碱治疗１４天血药浓度检测结果………………５６３．３ＫＫ．Ａｙ糖尿病小鼠口服小檗碱治疗１４天血糖血脂检测结果………………５７４．小结…………………………………………………………………………………………………………．．５９

第五章头花蓼提取物及其有效成分肠道茵代谢研究……………………………。６１

１．头花蓼提取物的制备……………………………………………………………一６１

１．１实验材料………………………………………………………………………．６１

１．１．１试药与材料…………………………………………………………………６１

１．１．２实验仪器与设备…………………………………………………………一６１

１．２实验方法………………………………………………………………………．６１

１．２．１头花蓼乙醇提取物的制备…………………………………………………６１

１．２．２头花蓼乙酸乙酯萃取物的制备…………………………………………一６２

１．２．３头花蓼提取物的ＨＰＬＣ检测……………………………………………．６２

１．３实验结果………………………………………………………………………．６３２．头花蓼提取物及其有效成分肠道菌代谢研究…………………………………６４

２．１实验材料………………………………………………………………………．６４

２．１．１药品与试剂………………………………………………………………一６４

２．１．２实验仪器与设备…………………………………………………………一６４

２．１．３实验动物…………………………………………………………………一６４

２．２实验方法………………………………………………………………………．６５２．２．１肠菌培养液的配制………………………………………………………．．６５

  本文关键词：肠道菌作用下小檗碱体内药代动力学及头花蓼活性成分代谢特征研究，由笔耕文化传播整理发布。