代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础 - 副本

  本文关键词：代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础，由笔耕文化传播整理发布。

2009 第十一卷

第一期

★Vol.11 No.1

代谢组学研究冠心病中医分型的体内物质基础＊
□王广基＊＊ 阿基业 严 蓓 郝海平 刘林生 张 颖 顾胜华 郑媛婷
（中国药科大学药物代谢动力学重点实验室 南京 210009） 南京 210029）

朱萱萱
（江苏省中医院临床研究所药理实验室

摘

要： 目的： 研究冠心病不同中医证型的体内物质基础以探索中医分型的科学内涵。方法： 采

用基于 GC-TOF/MS 测定技术的代谢组学研究手段对痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆中小分 子化合物进行全面检测， 利用多变量数据分析和方差分析等统计方法研究血浆内源性化合物在各组 间差异。结果： 代谢组学分析不但可把痰阻心脉型和气阴两虚型冠心病患者区别分开， 还可以与健康 组明显区分。利用 PLS_DA 建立的痰阻心脉和气阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指 氨基酸代谢 标具有显著的相关性。两证型间多个内源性代谢物的含量存在明显差异并与能量代谢、 和核苷酸代谢异常相关。结论： 代谢组学的整体数据和标志物信息均显示出痰阻心脉和气阴两虚型 冠心病的差异， 提示代谢组学所研究的体内小分子化合物可能正是中医分型的物质基础。 关键词： 代谢组学 痰阻心脉 气阴两虚 中医证型 冠心病

中医的辨证施治是长期临床实践的经验总结， 千百年来，中医在辨证施治思想的指导下在临床上 取得了巨大成就，但其理论的科学性一直缺乏有力 的直接证据加以证实。其中最为根本的问题是中医 分型理论基础缺乏人体内在科学证据加以诠释。这 也是长期以来困扰中医药学家的难题。最新出现的 高通量小分子化合物测定分析方法—— —代谢组学为 中医辨证分型的研究提供了一个崭新的平台。

代谢组学是后基因组时代兴起的一门新的系统 蛋白质组学并称为三 生物学技术方法， 与基因组学、 大组学。它在许多学科领域都取得了喜人的成果， 特 [1~6] 别是生物医学领域 ， 它在疾病诊断和模型评价方 面显示了极大的优势。代谢组学定量检测生物体受 病理生理刺激和遗传修饰后的生物基质中代谢组 （即小分子代谢物群） 的变化 [7]。代谢组学的研究对象 是生物体整体代谢物，这与中医理论的整体观相一 致。从中医角度看来， 一种病表现的 “证” 可能有所差 异， 而不同的病可以表现出相似的 “证” 中医 ， “证” 必

收稿日期：2008-11-11 修回日期：2009-01-08 ＊

国家自然科学基金资助 （30630076 ： ） 中药复杂药效物质的确证及整体药代动力学研究新思路与方法， 负责人： 王广基； 国家自然科学基金资助 (30572228 ： ） 代谢组学与人参双向调节血压作用新评价与机制探索， 负责人： 王广基； 国家科技支撑计划基金资助 （2006BAI08B04-05 ： ） 中药复 方作用和配伍评价研究， 负责人： 王广基。

＊＊

联系人：王广基， 教授， 博士研究生导师， 主要研究方向： 药物代谢动力学新技术与新方法的建立及其在创新药物临床前药代动力学评价中的 E-mail: guangjinong@hotmail.com。 应用， 中药药效物质基础与整体药代动力学研学， 代谢组学与药代动力学整合研究，

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然伴随着病人体内生理、 病理变化， 那么体内的小分 子化合物群也应该发生着相应的改变，代谢组学可 以通过对这些由疾病诱导产生的代谢产物的变化进 行分析，运用化学计量学等多变量数据统计方法对 不同证型进行分类，挖掘出与某一证型相关的共性 特征标志物 （群） 及相应代谢网络， 帮助了解 “证” 的 生物学本质。 国内已经有研究开展了基于液相/质谱和核磁共 振测定技术的中医证的动物代谢组学研究 [8~10]。我们 研究组曾经对高血压病人的中医分型进行了研究 ， 发现代谢组学可以区分正常和高血压病人，但各个
[11]

气相色谱-飞行时间质谱 （GC/TOF-MS） 监测系统 （GC： 安捷伦 6890N 气相色谱仪， 配安捷伦 7683B 自 动进样器和 G2614A 型 100 位样品进样盘； TOF-MS： Pegasus III，Leco 公司， 美国） 气相毛细管柱为熔融 ， 的 硅 烷 化 石 英 毛 细 管 （DB -5 固 定 相 ， 内 膜 厚 度 0.18μm， 10m×0.18mm 直径， J&W Scientific， 美国） 。 2． 实验对象和筛选标准 健康对照组为南京中医药大学第一附属医院体 检中心经普通体检及实验室检查排除心脑血管、 肝 肾、内分泌等疾病的健康志愿者 27 例 （其中男 13 例、 14 例） 且无下述两种中医证型。所有冠心病 女 ， 病例均来源于该院心内科住院病人，冠心病诊断标 准参照国际心脏病学会和协会及世界卫生组织临床 命名标准化联合专题组报告 《缺血性心脏病的命名
[15] 中医辨证分型参照 《中药(新药)临床 及诊断标准》 ， [16] 研究指导原则》 ， 并经冠状动脉造影确诊为冠心病， 经过肝肾等项目检查无其它生化和器质性疾病。最

中医病症间分型不明确，特别是各组缺乏特征的生 物标志物，使得研究结果不能与体内生化代谢过程 取得联系， 难以深入说明中医证型的内在本质。但在 近期中医证型心肌缺血的大鼠模型中 发现了一些 病证特异的代谢通路。该研究结果也在一定程度上 为中医证型研究提供了有力支持。本研究以冠心病
[12]

患者为研究对象，研究中选取痰阻心脉和气阴两虚 两种实证和虚证为代表，运用已建立的基于气相色 谱/飞行时间质谱 （GC/TOF-MS） 测定技术的代谢组 学方法 [13~14] 分析不同中医证型冠心病间的血浆代谢 物变化规律， 研究冠心病中医辨证分型的客观指标， 并为认识冠心病中医证候的本质和阐明中医分型的 科学内涵提供直接证据。 一、材料与方法 1． 试剂与仪器 1,2-13C2-肉寇酸 （稳定的同位素内标， SigmaAldrich） 盐酸甲氧胺 ， （Sigma-Aldrich） 系列烷烃标准 ， 溶 液 （C8 -C20 和 C20 -C40，Sigma -Aldrich） 吡 啶 ， （Sigma-Aldrich） MSTFA 含 1% TMCS ， （MSTFA， N-甲 基-N-三甲基硅烷三氟乙酰胺； TMCS，三甲基氯硅 烷；Pierce 化学公司， 美国） 甲醇 ， （色谱纯，Tedia 公 司， 美国） 正庚烷 、 （色谱纯，Merck 公司， 德国） 超纯 ， 水 （自制， Millipore， 美国） 各鉴定用标准品、 ， EDTANa 等其它试剂 （色谱纯或分析纯） 。 低温高速离心机 （Sorvall Biofuge Stratos， 德国） ， 真 空旋转挥干 仪 （Speed-vac， Thermo Savant， 国） 美 ，

终筛选出两种中医证型， 一种是痰阻心脉 （共 29 例， 其中男 17 例、 12 例） 属实证， 女 ， 另一种是气阴两虚 其中男 9 例、 5 例） 属虚证。所有参加 女 ， （共 14 例， 实验的病人和健康志愿者均经过医院伦理委员会批 准并签署书面同意书。记录患者舌质、 舌苔、 脉象， 根 据中医症状的程度， 给胸痛、 胸闷、 气短、 心悸、 疲倦 乏 力、 畏寒肢冷 、 腰膝酸软 、 自汗、 不寐等 症状打 分 （无、 轻度、 中度、 重度分别为 0、 2、 分） 1、 3 。 3． 样品采集、 处理与 GC/TOF-MS 测定 采 所有样品均在冠状动脉造影前 1～3d 内采集， 血前一天统一进食标准餐，次日晨经肘静脉抽取受 试 者空腹 12h 静 脉 血 2mL 置 EDTA -Na 抗 凝 管 中 ， 室温静置后 3000 rpm 离心 10min，然后取上层血浆 置于-80 °C 冰箱保存。 样品处理与 GC/TOF-MS 测定参照已经建立的 方法 ：100μl 血浆用含内标的甲醇沉淀， 移取
[12~13， 17~18]

上清减压挥干， 之后进行肟化和三甲基硅烷化处理； 处理好的样品 1μl 不分流进样， 为使多种化合物能更 好地分析和分离， 采用程序升温模式。 4． 统计分析 采集的各个样品的谱图信息，经过 Leco TOF128

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MS 自带 ChromaTOF 2.0 软件转换为 CSV 文件， 经过 自编软件对谱图数据进行解析，解析出的色谱峰的 鉴定由其质谱图和保留指数与化合物谱图库或标准 对照品的质谱图和保留指数进行对照而确定，然后 用 SIMCA-P11 （Umetrics， Ume覽， 瑞典） 软件进行主成 分分析 （PCA） 或数据内在关系投影－偏最小二乘－判 [12~14， 17~18] 别分析 （PLS-DA） 。数据经过统计 One-way ANOVA （多重比较选用 Bonferroni） ，在 0.05 或 0.01 水平有显著性差异 （Bon－ ferroni 校 正 的 P 值 为 0.016 或 0.003， 分 别 由 0.05/3 或 0.01/3 算得 ， 其 中 3 为多重检验的次 数） ，最终确定多组间差 异有显著性意义的变量， 并鉴定这些可能的生物 标志物。 二、结 果

证， 最终确定可能的生物标志物 （见表 1） 。 结果显示： 痰阻心脉患者血浆软脂酸、 脯氨酸、 门 冬氨酸、 油酸、 谷氨酸、 苯丙氨酸和尿酸显著高于健康 对照组； 而次黄嘌呤和 4-羟基苯甲酸显著低于健康对 照组。 气阴两虚患者血浆琥珀酸、 门冬氨酸， 3-羟基丁 油酸、 软脂酸、 硬脂酸、 脯氨酸、 谷氨酸、 苯丙氨酸 酸、 显著高于健康对照组； （门） 而天 冬酰胺， 色氨酸、 次黄 嘌呤和 4-羟基苯甲酸显著低于健康对照组。

1． 人 血 浆 总 离 子 流 色谱图 （TIC） 经过 GC/TOF-MS 的 分析得到血浆总离子流

1, 丙氨酸; 2, 2-羟基丁酸; 3, 缬氨酸; 4, 磷酸; 5, 甘氨酸; 6, 丝氨酸; 7, 苏氨酸; 8, 氨基丙二酸; 9, 2,5-二氨基戊内酰胺; 10, 焦谷氨酸; 11, 羟脯氨酸; 12, 肌酸酐; 13, 半胱氨酸; 14, 脯氨酸; 15, 谷氨酸; 16, 苯丙氨酸; 17, 鸟氨酸; 18, 柠檬酸; 19, 葡萄糖; 20, 酪氨酸; 21, 1H-吲哚-3-丙酸; 22, 棕榈酸; 23, 尿酸; 24, 亚油酸, 油酸; 25, 色氨酸; 26, 胆固醇 图1 人血浆总离子流色谱图 （TIC）

色谱图 （TIC） ，每个 TIC 即是每个人的代谢图谱 （图 1） 。由 ChromaTOF 2.0 软 件解析以及利用 NIST 谱库和标准样品发现其中包 含大量的内源性代谢物， 例如氨基酸、 有机酸、 糖类、 脂肪酸等。 2． 多元数据处理结果 全体受试者血浆的 PLS-DA 分析得到三个主成 分的模型， 模型的解释度 （R2Y） 70.0%， 是 预测度是 （Q2Y） 44.4%， 它可解释 GC/TOF-MS 响应变量 （R2X） 的 29.2%。 PLS-DA 三维得分图 （图 2） 显示健康、 痰阻 心脉和气阴两虚三组间能够明显的区分开来，图中 每个点表示一个样本。从 PLS-DA 载荷图中寻找出 对 分 型 做 出 贡 献 的 差 异 变 量 ， 进 一 步 用 One -way ANOVA 和 Bonferroni 多重比较的方法处理来验证上 并用标准样品进行确 述结果， NIST 谱库中检索， 在
图 2. 健康对照、 痰阻心脉、 气阴两虚三组血浆代谢组的 PLS-DA 得分图 （PC1/ PC2/ PC3）

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痰阻心脉和气阴两虚组血浆中多种化合物存在 显著差异， 遗憾的是其中几个化合物未能鉴定。痰阻 心脉组色氨酸和天 （门） 冬酰胺显著高于气阴两虚 组； 而琥珀酸、 硬脂酸， 3-羟基丁酸显著低于气阴两 虚组。提示它们是区分这两种病证的可能的生物标 志物。 3． 主成分得分与中医症状分级量化得分的相关 性分析 对冠心病患者血浆进行 PLS-DA 分析后， 痰阻心脉和气 阴 两 虚 组 在 PLS -DA 二 维 得 分 图中也可明显区分开来， 这两组 在第一个和第二个主成分上都 有一个得分值， 每位患者的每种 中医症状都有分级量化得分， 将 每个主成分上的得分和每种 中 医症状得分做 Pearson 相关性分 析。如表 2 所示， 第一个主成分 （PC1） 的得分值分别与腰膝酸 不寐、 疲倦乏力的得分值有 软、 显著的相关性 （P < 0.01） 第 二 ； 个主成分 （PC2） 的得分值分别与 腰膝酸软、 不寐的得分值有显著 的相关性 （分别为 P < 0.05 和 P < 0.01） 。 三、讨 论
相关代 谢通路 内源性 代谢物 表1

阴两虚组数学模型参数与临床中医症状分级量化指 标具有显著的相关性，说明代谢组学所测定的体内 小分子化合物信息与临床各证型表现高度一致， 进 一步提示代谢组学所研究体内小分子化合物可能正 是中医分型的物质基础。而三组间内源性代谢物的 含量存在明显差异，提示两种证型冠心病患者的相 关生物代谢通路发生了改变，并且不同病证间生化 代谢通路又有所不同。

痰阻心脉和气阴两虚型冠心病患者血浆代谢物变化的统计分析结果 痰阻心脉 气阴两虚 两证型的比较 气阴两虚 显著性 与健康对 显著性 与健康对 显著性 与痰阻心 水平 照的比值 水平 照的比值 水平 脉的比值 +1.05 +1.70 +1.45＊＊ +1.23 +1.05 +1.20＊ +1.71 -1.13 +1.28＊ +1.22 +1.03 -1.25＊ +1.36
＊＊ ＊＊ ＊＊ ＊

三羧酸循环 琥珀酸 脂代谢 3-羟基丁酸 油酸 软脂酸 硬脂酸 氨基酸代谢 脯氨酸 谷氨酸 色氨酸 门冬氨酸 苯丙氨酸 天(门)冬酰胺 核苷酸代谢 次黄嘌呤 尿酸 其它

N.S. N.S. 0.010 0.036 N.S. 0.050 0.000 N.S. 0.021 0.005 N.S. 0.043 0.001 0.000

+1.71＊ +3.93 +1.38
＊＊

0.032 0.000 0.002 0.003 0.006 0.004 0.000 0.000 0.020 0.001 0.016 0.001 N.S. 0.000

-1.63☆ -2.32 -1.14 -1.12 -1.20☆ -1.14 -1.08 +1.34 -1.05 -1.09 +1.32☆☆ +1.24 +1.16 +1.54
☆☆ ☆☆

0.049 0.008 N.S. N.S. 0.033 N.S. N.S. 0.000 N.S. N.S. 0.005 N.S. N.S. N.S.

+1.64＊＊
＊＊

+1.26＊＊ +1.36＊＊ +1.86＊＊ -1.52 +1.33
＊＊

+1.35＊
＊＊

-1.28＊ -1.55＊＊ +1.17 -4.20＊＊

4-羟基苯甲酸 -2.73＊＊

痰阻心脉型 冠心病患者 主 要表现为心闷如窒而痛， 或痛引 肩背， 气短喘促， 体胖多痰， 身体

注： +” “-” “ 和 分别表示与健康对照组相比， 患者血浆中化合物相对浓度有所升高和降 ＊ ＊＊ 分别在 0.05 和 0.01 水平与健康对照组相比， 低， N.S.： 无统计学差异； ， ： 有显著 ☆ ☆☆ 痰阻心脉和气阴两虚患者血浆化合物相对浓度分别在 0.05 和 0.01 性差异； ， ： 水平有显著差异 （One-way ANOVA 和 Bonferroni 。 ） 表2 主成分得分与中医症状分级量化得分的相关性分析 ） 主成分 （PC 得分 PC1 症状得分 Pearson 相关系数 腰膝酸软 不寐 -0.659
＊＊

困重， 舌苔浊腻或滑， 脉滑； 气阴两虚证患者主要表 现为胸闷隐痛， 时作时止， 心悸气短， 倦怠懒言， 头昏 乏力， 口干咽干， 心烦失眠， 多梦， 舌红或有齿痕， 苔 薄， 脉沉细弱。本研究运用基于 GC/TOF-MS 的代谢 组学技术分析痰阻心脉型及气阴两虚型冠心病患者 和健康人血浆的代谢组，结果显示不仅两个证型与 健康对照组能够明显区分，而且两个证型之间也能 得到很好的分型。 利用 PLS_DA 建立的痰阻心脉和气

PC2 P值 0.000 0.000 Pearson 相关系数 -0.331
＊

P值 0.030 0.008

-0.540＊＊
＊＊

-0.399＊＊

疲倦乏力 -0.573 0.000 -0.189 0.225 注： P < 0.05， ＊ ＊＊P < 0.01， 主成分得分与症状得分显著相关 （双尾 。 ） 130

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能量代谢方面 与健康对照组相比，痰阻心脉患 者血浆脂肪酸，气阴两虚患者血浆琥珀酸和脂肪酸 显著升高，主要是因为心肌缺血会使交感肾上腺素 能系统的活动增强， 血中儿茶酚胺增高，， 导致蛋白脂 酶的活性增加， 内生性脂解作用增强， 使游离脂肪酸 增加。但由于脂肪酸的 β-氧化和三羧酸循环过程中 的各种脱氢反应因受氢体缺乏而受阻，三羧酸循环 中介产物琥珀酸堆积，心肌所摄取的脂肪酸不能氧 化供能。这种心肌脂肪的代谢障碍不仅使 ATP 消耗 增加、 合成减少， 还使得心肌耗氧量增加 [19]。此外， 气 阴两虚患者血浆高水平 3-羟基丁酸 （痰阻心脉患者 有升高趋势， 但无统计学意义） 也与能量代谢的异常 相关， 这可能是由机体代偿保护作用引起的， 因为 3羟基丁酸是脂肪酸在肝中氧化分解的中间产物， 是 肝外组织不可缺少的能量来源，它可以改善缺血过 程中的能量代谢并抑制再灌后的脂质过氧化，具有 中枢保护作用 [20~21]。只有气阴两虚患者血浆琥珀酸升 高， 气阴两虚患者血浆脂肪酸升高程度也更加显著， 且 3-羟基丁酸显著高于痰阻心脉患者，说明气阴两 虚伴随更严重的能量代谢异常。能量代谢障碍有可 “心 能导致气血运行不畅， 这与痰阻心脉证表现出的 闷如窒而痛” 身体困重” 、 “ ，以及气阴两虚证表现出 的 “胸闷隐痛” 倦怠” 乏力” 、 “ 、 “ 相一致。 氨基酸代谢方面 文献报道指出炎症和免疫激活 是冠心病的重要致病机制，免疫激活与色氨酸的降 解密切相关， 因此冠心病人体内色氨酸水平会降低， 这可能是情绪障碍和抑郁的主要病机 [22]。本研究中， 与健康对照组相比，痰阻心脉患者血浆色氨酸水平 稍有下降 （无统计学意义） 而气阴两虚患者血浆色 ， 氨酸水平显著下降且显著低于痰阻心脉患者，这就 、 “ 、 “ 与气阴两虚患者所表现出的“懒言” 头昏” 心烦 失眠” 等情绪障碍相一致。此外， 谷氨酸代谢异常也 [23] 与中枢疲劳有关 ， 因此， 气阴两虚证中的头昏乏力 感可能也与谷氨酸的代谢异常有一定关系。脯氨酸 是由谷氨酸合成的，是蛋白胶原的主要成分 （The Human Metabolome Database, html） 而胶原作为动脉粥样硬化斑块的主要成分， ， 在 冠心病的稳定性/不稳定性和发展过程中有非常重要

的作用，所以两种证型冠心病患者血浆脯氨酸的升 高提示着其潜在的危险性 [24]。 核苷酸代谢尿苷和次黄嘌呤是缺血心肌核苷酸 降解的主要产物。次黄嘌呤会进一步代谢成尿酸 [25]。 痰阻心脉和气阴两虚患者血浆核苷酸中间产物次黄 嘌呤显著降低， 而终产物尿酸水平升高 （气阴两虚组 只有升高趋势， 而无统计学意义） 均说明缺血的心 ， 肌核苷酸代谢被激活，从次黄嘌呤到尿酸的转换与 毒性自由基的形成呈正相关 [26]。 高水平的血浆尿酸是 心血管疾病和高血压疾病的独立的危险因素，它与 与肾功能异常也有密切关系 [27~29]。此外， 有学者指出 高血尿酸与肥胖密切相关， 肥人多痰， 血尿酸增加血 小板的黏附性， 促进粥样斑块的形成， 都可引起瘀血 内生, 所以高血尿酸可能是 “痰瘀” 致病因素的物质 [30] 基础之一 。 两种中医证型的共同特点是它们与能量代谢、 氨基酸代谢、核苷酸代谢等多种代谢通路的异常相 关， 这是机体多个系统功能改变共同造成的结果， 但 是不同病证之间又有不同的代谢特点， 其中琥珀酸、 硬脂酸、 色氨酸、 3-羟基丁酸水平在两种证型间有显 著差异，它们的高低与患者表现出的症状有良好的 相关性， 有可能成为这两种证客观量化的诊断指标。 由此说明利用代谢组学技术能够全面地反映痰阻心 脉和气阴两虚证心肌缺血冠心病的代谢共性和各自 特征， 它是中医现代化研究的有效手段。 参考文献
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Metabolomic investigation into variation of endogenous metabolites in professional athletes subject to strength -endurance training. J Appl Physiol, 2008. (in press) 18 Lu Y H, A J, Wang G J, Hao H P, Huang Q, Yan B, Zha W B, Gu S H, Ren H C, Zhang Y, Fan X, Zhang M, Hao K. Gas chromatography/ time-of-flight mass spectrometry based metabonomic approach to dif－ ferentiating hypertension- and age-related metabolic variation in spon－ taneously hypertensive rats. Rapid Commun Mass Spectrom, 2008, 22 (18): 2882~2888. 19 彭章平, 乐建华. 现代缺血性心脏病学. 北京：人民军医出版社, 2000: 69~70. 20 Suzuki M, Suzuki M, Kitamura Y, Mori S, Sato K, Dohi S, Sato T, Mat－ suura A and Hiraide A. Beta-hydroxybutyrate, a cerebral function im－ proving agent, protects rat brain against ischemic damage caused by permanent and transient focal cerebral ischemia. Jpn J Pharmacol, 2002, 89 (1): 36~43. 21 Dardzinski B J, Smith S L, Towfighi J, Williams G D, Vannucci R C and Smith M B. Increased plasma beta -hydroxybutyrate, preserved cerebral energy metabolism, and amelioration of brain damage during neonatal hypoxia ischemia with dexamethasone pretreatment. Pediatr Res, 2000, 48 (2): 248~255. 22 Wirleitner B, Rudzite V, Neurauter G, Murr C, Kalnins U, Erglis A, Trusinskis K and Fuchs D. Immune activation and degradation of tryp－ tophan in coronary heart disease. Eur J Clin Invest, 2003, 33 (7): 550~ 554. 23 邢雅玲, 余林中. 睡眠剥夺机制和中医药干预的进展. 中药药理与临 床, 2003, 19 (6): 47~49. 24 Yildiz A, Demirbag R, Yilmaz R, Gur M, Altiparmak I H, Akyol S, Aksoy N, Ocak A R and Erel O. The association of serum prolidase activity with the presence and severity of coronary artery disease. Coron Artery Dis, 2008, 19 (5): 319~325. 25 Burakowski S, Smoleński R T, Bellwon J, Kubasik A, Ciec'wierz D and Rynkiewicz A. Exercise stress test and comparison of ST change with cardiac nucleotide catabolite production in patients with coronary artery disease. Cardiol J, 2007, 14(6): 573~579. 26 Sj觟din B, Hellsten Westing Y and Apple F S. Biochemical mechanisms for oxygen free radical formation during exercise. Sports Med, 1990, 10 (4): 236~254. 27 Edwards N L. The role of hyperuricemia and gout in kidney and car－ diovascular disease. Cleve Clin J Med, 2008, 75 (Suppl 5): S13~16. 28 Dunkelgrun M, Welten G M, Goei D, Winkel T A, Schouten O, van Domburg R T, van Gestel Y R, Flu W J, Hoeks S E, Bax J J and Pold－ ermans D. Association between serum uric acid and perioperative and late cardiovascular outcome in patients with suspected or definite coro－ nary artery disease undergoing elective vascular surgery. Am J Cardiol,

〔World Science and Technology/Modernization of Traditional Chinese Medicine and Materia Medica 〕

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2009 第十一卷

第一期

★Vol.11 No.1

2008, 102 (7): 797~801. 29 Tatli E, Aktoz M, Buyuklu M and Altun A. The relationship between coronary artery disease and uric acid levels in young patients with a－

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Metabonomic investigation on Traditional Chinese Medicine patterns of coronary artery disease Wang Guangji，A Jiye，Yan Bei，Hao Haiping，Liu Linsheng，Zhang Ying，Gu Shenghua，Zheng Yuanting (Key Laboratory of Drug Metabolism and Pharmacokinetics, China Pharmaceutical University, Nanjing 210009, China) Zhu Xuanxuan (Pharmacological Laboratory of Clinical Research Institute, Jiangsu Provincial Hospital of Traditional Chinese Medicine, Nanjing 210029, China) To investigate on the pharmacological materia of Traditional Chinese Medicine (TCM) patterns of coronary

artery disease for revealing the essence of "Bian Zheng (pattern identification)", in the present study GC/TOF-MS based metabonomic method was utilized to profile plasma endogenous metabolites of patients with "Tan Zu Xin Mai Zheng (phlegm obstructing heart and vessels pattern)" and "Qi Yin Liang Xu Zheng (qi and yi vacuity pattern)". Significant metabonomic difference was observed between the two TCM pattern groups, patients and the healthy con－ trol, and the three groups were distinguished clearly by pattern recognition. Very good correlativity was observed be－ tween clinic TCM pattern index values and parameters in PLS_DA model of the two TCM pattern groups. The en－ dogenous compounds differentiating the two TCM patterns were involved in perturbation in energy, amino acid and nucleotide metabolism. In general, the whole model and biomarkers differentiated and characterized the two TCM patterns, suggesting that metabonomic phenotype, i.e., the endogenous compounds, be the pharmacological materia of TCM patterns. （责任编辑： 张志华 ）
（Continued from Page 152 ）

Progress of Sample Preparation Technique coupled with Analytical Technique in the Research of Natural Products Zhou Ting，Wang Jiayue，Xiao Xiaohua，Li Gongke （School of Chemistry and Chemical Engineering, Sun Yat-sen University, Guangzhou 510275 ） This review summarizes the progress of sample pretreatment method coupled with analytical technique in the research of natural products. Hyphenated techniques include supercritical fluid extraction, high-speed counter-current chromatography, microwave -assisted extraction, subcritical water extraction, solid phase extraction, solid phase microextraction and ultrasound -assisted extraction, which are coupled with analytical technique. 55 references are cited. Keywords: Natural Products; Sample Preparation; Hyphenated Technique; Progress. （责任编辑： 张志华 ）
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