姜黄素对硝普钠诱导的兔软骨细胞凋亡的作用与机制研究

发布时间：2018-02-11 15:48

  本文关键词： 姜黄素 关节软骨细胞 细胞凋亡 Wnt信号通路　出处：《南京中医药大学》2016年硕士论文　论文类型：学位论文

【摘要】：背景：骨性关节炎(Osteoarthritis, OA)是一种以逐渐发展的关节疼痛、僵硬和活动受限为特征的慢性进行性疾病。目前,OA的治疗大多集中在解除症状上对关节软骨的损伤修复和对软骨细胞功能的调控能抑制OA的进展。既往研究发现,姜黄素对于OA关节软骨组织具有多因素,多靶点的保护作用,临床上疗效确切,然而对于软骨细胞增殖与凋亡的具体干预机制尚不明确。目的：观察姜黄素对软骨细胞存活及凋亡的影响,探讨姜黄素抗骨性关节炎软骨细胞凋亡,保护软骨组织的作用及可能机制。方法：体外分离培养兔膝关节软骨细胞,并对其生长特点和形态学特征进行观察；应用CCK-8法测定不同浓度的姜黄素对软骨细胞存活率的影响；制备硝普钠(sodium nitroprusside, SNP)诱导的软骨细胞凋亡模型,硝酸酶还原法和流式细胞术分别观察姜黄素对培养基中一氧化氮(nitric oxide, NO)含量及软骨细胞细胞凋亡率的影响；Western blot法检测相关蛋白Caspase-3、GSK-3p及β-catenin的表达情况。结果：(1)在12h时,80, 160μmol·L-1的姜黄素已显现出明显的细胞毒性,与对照组比较有非常显著的差异(P0.01),40μmol·L-1的姜黄素对细胞存活率的影响弱于80,160μmol·L-'组,但与对照组相比,已有显著的差异(P0.05)。在24 h和48 h时,40μmol·L-1的姜黄素的细胞毒性随着时间的递增而增强,其细胞存活率与对照组之间有非常显著差异(P0.01)。2.5,5,10,20μmol·L-1各个浓度的姜黄素在48 h内均未见明显的细胞毒性(P0.05),且各组之间无显著性差异(P0.05)。(2)姜黄素中剂量组培养基中的NO含量下降最为明显,与模型组对比,差异具有统计学意义(P0.05)。姜黄素高剂量组与低剂量组中NO虽有下降的趋势,但与模型组相比,无显著的统计学差异(P0.05)。高剂量的姜黄素对于软骨细胞凋亡率的降低作用最强,与模型组和中、低剂量组比较,差异有统计学意义(P0.01)；低剂量组与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。(3) Western blot结果显示：模型组的Caspase-3, GSK-3p和3-catenin蛋白表达水平明显高于正常组(P0.01),姜黄素高剂量组的Caspase-3, GSK-3p和β-catenin表达与模型组比较明显减少(P0.05或P0.01),中剂量组的Caspase-3和β-catenin蛋白表达下降(P0.05),而低剂量组的蛋白表达水平虽有下降趋势,但与模型组比较,差异无统计学意义(P0.05)。结论：(1)在不同时间节点,各个浓度的姜黄素都未见对软骨细胞的增殖有明显的促进作用。姜黄素对体外培养的兔膝关节软骨细胞存在一定的安全浓度范围(0-20μmol·L-1),超过40 μmol·L-1的浓度存在明显的细胞毒性,且作用时间越长,细胞的存活率越低。(2)体外培养的软骨细胞在凋亡过程中可释放大量NO至培养基中。姜黄素可下调凋亡软骨细胞培养基中的NO含量,抑制SNP诱导的软骨细胞凋亡。中剂量的姜黄素在降低培养基中NO含量方面优于其他干预组,而高剂量姜黄素对软骨细胞凋亡的抑制作用更为显著。(3) Wnt/p-catenin信号通路可能参与了软骨细胞凋亡的过程,姜黄素能抑制体外SNP诱导的软骨细胞凋亡,其机制可能与下调Wnt/β-catenin信号通路中的关键蛋白GSK-3p,β-catenin及凋亡相关分子Caspase-3的表达有关。
[Abstract]:Objective : To observe the effect of curcumin on the survival and apoptosis of articular cartilage . ( 2 ) There was no significant difference in the expressions of Caspase - 3 , 3 - catenin and 尾 - catenin in cultured rabbit knee articular chondrocytes compared with model group ( P0.05 ) .

【学位授予单位】：南京中医药大学
【学位级别】：硕士
【学位授予年份】：2016
【分类号】：R274

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本文编号：1503423